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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于HLPC流动相问题
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阿叉

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于HLPC流动相问题

我想先用热乙醇法萃取藻类叶绿素，然后再用高效液相色谱进行分析，可是液相色谱的条件怎么设定了？  
文献中都是用丙酮法萃取叶绿素，然后再用高效液相色谱分析，比如
色谱条件以Pinnacle Ò C18为色谱柱，V(甲醇)：V(丙酮)=80:20并加入质量分数为0.11%的冰乙酸为混合流动相，流速为1.10ml/min，检测波长为460nm，控制出峰时间10-30min，用高效液相色谱法进行叶绿素含量的测定。

我的意思就是能不能直接用热乙醇萃取，然后按文献中丙酮萃取后所采取的液相色谱条件，进行色谱分析了，这样到底可行吗？跪求高手，如果不能，能告诉我比较好的色谱条件？

[ Last edited by 1949stone on 2010-12-19 at 12:59 ]
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1楼 2010-12-18 16:28:12
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Adam_Li at 2010-12-18 17:03:43:
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有 ...

文献中用丙酮当萃取剂再用超声波萃取的，那么我想我可以用热乙醇萃取再用超声波萃取的，那么这样效果会不会好很多？还有就是这个超声波萃取仪器是不是就是那个超声波清洗机啊 ？
第二个问题，你说把乙醇有机溶剂蒸发掉，那么温度要控制多少才没有影响了？乙醇的蒸发量是多少不会有影响？还有乙醇蒸发掉了，那叶绿素不是不溶了，不是产生影响？
第三个问题，按你说的先过一针纯萃取液，和叶绿素，看峰形对比，那么这个峰形对比是个什么样才能说明方法的可行性啊，先过一针热乙醇，峰形怎么样才能说明以丙酮为萃取剂所选取的流动相以及别的色谱条件，再以热乙醇取代丙酮后该色谱条件是可行的了，简单点说，就是过一针得到什么样的峰形能说明我选择的流动相是可行的，是比较好的了？

我是新手，不懂的地方很多，所以我尽量说的详细点，以免产生歧义啊，也希望你能多多指导小弟弟我，还希望不要先烦啊 先谢谢了
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15楼2010-12-22 11:34:06
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Adam_Li

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+3):鼓励积极参与~~~ 2010-12-18 17:07:43
看天(金币+3):鼓励回答 2010-12-18 17:07:48
阿叉(金币+1): 2010-12-19 12:29:36
阿叉(金币+1): 2010-12-19 13:07:23
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有机溶剂，如果没有对这个流动相做过测试的话可能回出现意外情况。
既然是做试验当然要做很多尝试，你说的方法如果别人没有做过，你当然要做过了才知道结果嘛。尝试之前你可以先过一针你的纯萃取液，然后再过叶绿素的溶液，这样可以对峰形做一个对比。而且先过热乙醇的话也可以初步判断你这个想法是否可行。
希望对你有所帮助。
我就是做hplc的，不过经验不是很多，而且我做的是表达蛋白的，和你做的流动相差别很大。
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2楼2010-12-18 17:03:43
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-19 11:08:02
引用回帖:
Originally posted by 阿叉 at 2010-12-18 16:28:12:
我想先用热乙醇法萃取藻类叶绿素，然后再用高效液相色谱进行分析，可是液相色谱的条件怎么设定了？  
文献中都是用丙酮法萃取叶绿素，然后再用高效液相色谱分析，比如
色谱条件以Pinnacle Ò C18为色 ...

可以的，样品怎么来的不影响后面的分析方法的，你可以按照自己的方法提取，然后按照别人的方法分析的。
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3楼2010-12-19 09:46:39
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Adam_Li at 2010-12-18 17:03:43:
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有 ...

你和楼上的讲的不一样啊
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4楼2010-12-19 12:43:52
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