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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PET32a 表达载体和PMD19-T 克隆载体，是否可以用之前养在DH5a里扩增？
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PET32a 表达载体和PMD19-T 克隆载体，是否可以用之前养在DH5a里扩增？

是否可以只买一次这些载体，然后可以不断的在DH5a里面扩增，就不用再买了？
谢谢解答
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1楼 2010-12-18 09:43:52
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
tongxinkxy(金币+1):谢谢 2010-12-18 14:59:44
当然可以的，呵呵。转化到top10或者DH5a里面，然后抽提质粒就OK了。

[ Last edited by brightfuture01 on 2010-12-18 at 10:03 ]
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2楼2010-12-18 10:02:44
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-18 10:02:44:
当然可以的，呵呵。转化到top10或者DH5a里面，然后抽提质粒就OK了。

[ Last edited by brightfuture01 on 2010-12-18 at 10:03 ]

请问两个T载体都可以，对吗？
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3楼2010-12-18 11:24:35
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
T载体是线性化的没办法哈~~
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4楼2010-12-18 11:28:37
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-18 11:28:37:
T载体是线性化的没办法哈~~

看着有点晕，那两个都不可以吗？
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5楼2010-12-18 11:33:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-18 13:58:08
tongxinkxy(金币+2):谢谢你的解答，现在明报了 2010-12-18 14:58:48
PET32a 表达载体可以的，PMD19-T 克隆载体连接了PCR产物就不是线性的了，也是可以的，单独的PMD19-T 克隆载体就不能了。
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6楼2010-12-18 11:54:10
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-18 13:58:29
tongxinkxy(金币+1):谢谢 2010-12-18 14:59:08
引用回帖:
Originally posted by tongxinkxy at 2010-12-18 11:33:10:


看着有点晕，那两个都不可以吗？

pET是环状的，所以可以转化了冻存，线性化的T载体是不行的哦~
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7楼2010-12-18 12:59:09
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lulu1986

捐助贵宾 (小有名气)
tongxinkxy(金币+1):谢谢 2010-12-18 14:59:16
理论上可以。但因pMD-19为线性片段，所以必须转化之前进行自连。用的时候，还得用EcrRv进行酶切处理。
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8楼2010-12-18 14:10:47
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rioarsenal

金虫 (正式写手)

不行

引用回帖:
Originally posted by tongxinkxy at 2010-12-18 09:43:52:
是否可以只买一次这些载体，然后可以不断的在DH5a里面扩增，就不用再买了？
谢谢解答

不行，T载体是断开的，不是闭合环状，不能复制的
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9楼2010-12-18 14:31:03
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xingxing342

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PET系列载体都可以转化保存菌种的；T载体不可以的，用完还得再买的。
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10楼2010-12-21 08:32:54
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xingxing342 at 2010-12-21 08:32:54:
PET系列载体都可以转化保存菌种的；T载体不可以的，用完还得再买的。

请问DH5a是否可以扩增，从-20取菌种用？
用pET系列表达载体，然后可以用DH5a当做表达菌株吗？如果不可以，要用什么表达菌株呢？
谢谢
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11楼2010-12-21 08:46:59
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xingxing342

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by tongxinkxy at 2010-12-21 08:46:59:

请问DH5a是否可以扩增，从-20取菌种用？
用pET系列表达载体，然后可以用DH5a当做表达菌株吗？如果不可以，要用什么表达菌株呢？
谢谢

取DH5a菌种作成感受态细胞，感受态在-70°c一般半年有效，菌种无限繁殖了。PET载体可以用DH5a、BL21等转化。
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12楼2010-12-21 09:03:18
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by tongxinkxy at 2010-12-21 08:46:59:

请问DH5a是否可以扩增，从-20取菌种用？
用pET系列表达载体，然后可以用DH5a当做表达菌株吗？如果不可以，要用什么表达菌株呢？
谢谢

DH5a是克隆菌，不是表达菌，可以用于重组质粒的转化、鉴定，最后要把验证正确的重组质粒提出来转进表达用的菌株。根据载体上用于诱导的启动子来选择表达菌，比如是T7启动子的话，就用T7噬菌体的溶源菌，比如BL21（DE3）之类的
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13楼2010-12-21 09:04:47
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