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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】关于琼脂糖凝胶电泳
汕头大学海洋科学接受调剂
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real-gold

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于琼脂糖凝胶电泳

跑两个片段相近时琼脂糖凝胶电泳电压，电泳时间怎么确定？是电压高一点好，还是低一点好，时间怎么确定？如图1%胶，上样量5ul ，140V ，跑30min, 发现条带没有跑开，我是muti-pcr，在2000bp ，1800bp,2200bp会有条带。图上marker最亮的两条带分别是2000bp   1000bp.而且所跑的条带不整齐，微笑。是不是上样量太大的原因，还是因为。。。。？谢谢各位了！

[ Last edited by real-gold on 2010-12-17 at 09:34 ]
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1楼 2010-12-17 09:30:27
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-12-19 07:08:47
我觉得你的电压有点高啊 。
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2楼2010-12-17 09:47:17
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)
★ ★
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-12-17 11:05:24
虽然跑的不是很开，但已经分开了，可以试试marker多点几处或者点在中间，比较观察，也可以试试100V，45min的电泳条件，对于200bp ladder marker，这样算是跑的不错的效果的了~~
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3楼2010-12-17 09:48:56
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梦想起飞

铜虫 (小有名气)
★ ★
rainwander(金币+2):鼓励积极参与~~~ 2010-12-18 09:03:11
我也举得你的电压有点偏高了……降低电压，延长时间，试试
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4楼2010-12-17 10:21:00
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wwllkkhh

金虫 (小有名气)
偶没敢跑过这么高的电压，一般都是在100V左右
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5楼2010-12-17 13:33:21
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adslye

银虫 (正式写手)
我都是140V，不过一直没考虑过这个问题~今天了解了。。。
来学习学习~~
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6楼2010-12-17 13:43:35
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dandan20088810

金虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare:这个建议？我不敢确认，因为我没有试过２％胶分离２ｋｂ，理论上１％胶对２００ｂｐ差异还是能开出来的。谢谢你的建议。 2010-12-19 07:13:52
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-12-19 07:14:03
1800 2000 2200三条带差异不大，可能不好分，建议加大胶的浓度，2%或3%
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7楼2010-12-17 15:43:42
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sutao1979

木虫 (著名写手)
电压高，pcr产物浓度高，两者都降低就解决了
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8楼2010-12-18 01:13:12
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jian52166

金虫 (小有名气)
我觉得可以分电压分时间跑跑试试，以前跑小分子量的试过，就是150V 5min,140V 5 min,120V  10min,100V  20min,不知道这个行不行
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9楼2010-12-18 10:25:28
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yj-lzx

荣誉版主 (文坛精英)
俺一般120v~~~
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10楼2010-12-18 15:08:04
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gaoxiang6521

铁杆木虫 (著名写手)
你可以灌竖长的胶；加大胶的浓度，可以2.5%；降低电压，这个肯定可以分出来的，多跑一段时间，甚至小的条带跑出去都没问题的
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11楼2010-12-18 17:05:31
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
试试用0.7的胶，尽可能的薄（6μl 满），跑你的样可能效果比较好。
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12楼2010-12-18 21:37:48
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real-gold

银虫 (小有名气)
[quote]Originally posted by sutao1979 at 2010-12-18 01:13:1

[ Last edited by real-gold on 2010-12-19 at 16:43 ]
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13楼2010-12-19 16:42:13
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real-gold

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jian52166 at 2010-12-18 10:25:28:
我觉得可以分电压分时间跑跑试试，以前跑小分子量的试过，就是150V 5min,140V 5 min,120V  10min,100V  20min,不知道这个行不行

第一次听说还有这样的跑法，什么原理？
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14楼2010-12-19 16:47:12
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real-gold

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gaoxiang6521 at 2010-12-18 17:05:31:
你可以灌竖长的胶；加大胶的浓度，可以2.5%；降低电压，这个肯定可以分出来的，多跑一段时间，甚至小的条带跑出去都没问题的

楼下的为什么说要使用更低的胶浓度？胶浓度该怎么确定好？
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15楼2010-12-19 16:50:13
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200903015

铁虫 (初入文坛)
电压太高了，60至90就够了
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16楼2010-12-19 18:38:53
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chenxf861010

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
是电压太高了，条带都没有跑开。我们都是跑90V的。
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17楼2012-02-09 16:35:06
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chjinzhi

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你可以用2%的浓度，那样能够将条带分开。如果不是很明显，可以延长时间，不过跑胶的浓度还是要2%。
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18楼2012-08-01 16:11:01
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
电压100  用1.5的胶跑时间长点  样点少点就可以啦
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19楼2012-08-02 09:51:30
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hongqifei

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1017338楼: Originally posted by dandan20088810 at 2010-12-17 15:43:42
1800 2000 2200三条带差异不大，可能不好分，建议加大胶的浓度，2%或3%

增加胶浓度对增加小片段DNA的分辨率效果明显。楼主的片段2000左右，我认为应该用更低浓度的胶来区分。
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20楼2012-08-02 14:23:09
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qianshengguo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我一般160v，40min,如果用冰块的话，电压超过200v都可以
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21楼2012-08-03 17:22:03
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