24小时热门版块排行榜    

查看: 1770  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】引物设计信息如此,touchdownPCR如何设计? 已有3人参与


这是设计的引物的详细参数,1kb的大小,Tm63左右,如何设计touchdown-PCR,因为之前跑过温度梯度,好像出现了1000bp的条带,但是还有许多短杂带,想用TD PCR来扩增特异性条带
PS:这个是根据已知物种的序列,设计未知物种的同源序列的PCR引物

各位,如何设计?
  


起始温度是不是应该高于65啦?从68度如何?每循环降低0.5度,直到62?然后62度持续?

做过TD PCR的给小弟指点指点。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiye2214

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-16 22:12:19:
我估计第一个温度可以直接上70度了,然后每一个循环降半度

杂带不怕,挖出目的条带克隆了测序,再设计引物P过~

上70度,下是62度?还是更低点?
6楼2010-12-16 22:23:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+5):good 2010-12-16 22:13:29
我估计第一个温度可以直接上70度了,然后每一个循环降半度

杂带不怕,挖出目的条带克隆了测序,再设计引物P过~
2楼2010-12-16 22:12:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-16 22:12:19:
我估计第一个温度可以直接上70度了,然后每一个循环降半度

杂带不怕,挖出目的条带克隆了测序,再设计引物P过~

上面的Tm值可信吗?
同样的序列,送样单上给的和软件显示的不一样信哪个?
小木虫之有关部门负责人
3楼2010-12-16 22:15:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-16 22:16:48:


我信合成单上50mM [Na+]的Tm,把这个值加上10度左右,做鉴定级PCR毫无压力~~
不过touch-down 可以更猛一点往上加,反正要降的……

啥是鉴定级
你用什么酶?
小木虫之有关部门负责人
5楼2010-12-16 22:18:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 5/250 2026-08-16 18:38 by lxmichacl
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 72/3600 2026-08-16 13:15 by 医学老男孩
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见