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xwsooo

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】HRM技术的几个问题

我搜索了些HRM的资料看,现在还有些不明白的地方:
1。溶解曲线的差异是根据碱基含量的不同,那么就要求个样品的DNA含量一致才不会影响结果,我提取的是外周血DNA,那么如何保证DNA含量的一致呢?
2。对于一对引物,需不需要要求T m值差异要大些?引物是不是和普通PCR 的引物一样呢?
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by lovenlong at 2010-12-15 20:26:33
1.要保证PCR体系的一致性,把相同的反应物混合后分装,最后加有差异的成分(一般是DNA或引物),稍微甩一下,上面滴点矿物油(Mineral Oil,SIGMA M5904).
2.DNA用量不要太多(10微升一般10~30ng),定量稀释差不多 ...

你做HRM PCR的时候样品做复孔吗?
23楼2015-08-17 14:59:45
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看晕我了,没看明白你的意思
2楼2010-12-15 16:22:36
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xwsooo

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-12-15 16:22:36:
看晕我了,没看明白你的意思

不好意思,我现在先自我解释一下 ,首先HRM技术的精确性受到不同标本中DNA浓度的影响,所以必须先保证DNA 浓度的一致,方法有,用紫外分光光度计测量吸光度,用TE稀释至1.0.
第二,与两条引物的tm差应该无关吧。但我还不明白的是HRM需不需要设计特异性引物,有别于普通PCR引物设计的那种??/
最后都说HRM成本低,那我想了解如果做500份标本,那么大概要花多少RMB?
3楼2010-12-15 17:03:02
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引用回帖:
Originally posted by xwsooo at 2010-12-15 16:13:25:

我提取的是外周血DNA,那么如何保证DNA含量的一致呢?
  

上边这句话啥意思
4楼2010-12-15 17:09:29
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