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lichonglx

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[交流] 【求助/交流】胞内表达的EGFP想做western-blot

如题，想做个western-blot看看到底有没有EGFP表达，有谁做过的传授下具体方法啊，例如破细胞方法、抗体选择之类的都行，以前没做过western-blot问的不清楚还请见谅，大家明白意思就行了，速回，谢谢了

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1楼 2010-12-10 09:44:05

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yinsongna

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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-10 14:39:37

照个荧光不就看到EGFP是否表达了吗
用细胞刮刀直接把细胞挂下来，加细胞裂解液（可以买，也可以自己配，分子克隆上都有），加loading buffer 煮蛋白，蛋白电泳，转膜，封闭，加一抗二抗，曝光。。。大概的流程就是这样，你可以看下分子克隆，书上都写的有

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2楼2010-12-10 11:20:48

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lichonglx

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引用回帖:

Originally posted by yinsongna at 2010-12-10 11:20:48:
照个荧光不就看到EGFP是否表达了吗
用细胞刮刀直接把细胞挂下来，加细胞裂解液（可以买，也可以自己配，分子克隆上都有），加loading buffer 煮蛋白，蛋白电泳，转膜，封闭，加一抗二抗，曝光。。。大概的流程就 ...

我想证明是荧光蛋白在发光，所以要买单抗和二抗，我是想问问有没有对应EGFP的的抗体，还是用GFP的

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3楼2010-12-10 22:27:58

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