查看: 2117  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lichonglx

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】胞内表达的EGFP想做western-blot

如题,想做个western-blot看看到底有没有EGFP表达,有谁做过的传授下具体方法啊,例如破细胞方法、抗体选择之类的都行,以前没做过western-blot问的不清楚还请见谅,大家明白意思就行了,速回,谢谢了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lichonglx

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by yinsongna at 2010-12-10 11:20:48:
照个荧光不就看到EGFP是否表达了吗
用细胞刮刀直接把细胞挂下来,加细胞裂解液(可以买,也可以自己配,分子克隆上都有),加loading buffer 煮蛋白,蛋白电泳,转膜,封闭,加一抗二抗,曝光。。。大概的流程就 ...

我想证明是荧光蛋白在发光,所以要买单抗和二抗,我是想问问有没有对应EGFP的的抗体,还是用GFP的
3楼2010-12-10 22:27:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

yinsongna

金虫 (正式写手)



dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-10 14:39:37
照个荧光不就看到EGFP是否表达了吗
用细胞刮刀直接把细胞挂下来,加细胞裂解液(可以买,也可以自己配,分子克隆上都有),加loading buffer 煮蛋白,蛋白电泳,转膜,封闭,加一抗二抗,曝光。。。大概的流程就是这样,你可以看下分子克隆,书上都写的有
2楼2010-12-10 11:20:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小龙sailor

铜虫 (小有名气)


★ ★
dhd997(金币+2):good 2010-12-11 08:45:47
挂细胞的方法有点麻烦 , 我推荐先用胰酶消化然后加培养基中和然后离心去上清,直接加1×sds裂解 99℃10min 样品-80℃保存就好了
wstern blot 像GFP这样的蛋白抗体特异性和好的  一般的就行了
4楼2010-12-10 22:54:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Zedone

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同学,你好,请问你的EGFP现在表达成功了么,能够成功产生荧光么?我现在急需要一个egfp的表达质粒,不知道您能不能帮帮忙呢?
5楼2012-12-28 11:14:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 6/300 2026-09-02 23:59 by rM1TE0WVDIIY
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 3/150 2026-09-02 22:50 by rM1TE0WVDIIY
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +14 Kittylucky 2026-08-27 15/750 2026-09-02 19:35 by liumei0601
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
信息提示
请填处理意见