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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物是否合适
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物是否合适 已有4人参与

最近设计了三对引物Pa、Pb、Pc试着鉴别a、b、c三个种，采用相同的条件（50度退火）扩增了一次，得到的电泳图如下：右起为DL2000，引物Pc的空白，引物Pa分别扩增a、b、c，引物Pb分别扩增a、b、c，引物Pc分别扩增a、b、c。似乎仅C引物勉强为出现干扰，想请教大家有可能对扩增条件加以优化达到鉴别要求吗？这几对引物是否有希望派上用场呢
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1楼 2010-12-08 21:46:37
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
沉了
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2楼2010-12-12 12:08:03
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恒星年

银虫 (正式写手)
★
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这电泳图也太、、、、不清楚了，还有目的片段多大啊？
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3楼2010-12-13 11:05:00
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先电泳跑的就有问题，连M都那样了就重跑吧
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4楼2010-12-13 13:39:04
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-12-13 13:39:04:
首先电泳跑的就有问题，连M都那样了就重跑吧

是太扩散了，顺便请教一下，最近的电泳也老出问题，总是不清楚。胶浓度0.8%，电泳液换过了，电泳条件90v,150mA。条带老集中不了，还有成像聚焦也没效果，不知道哪个环节出了问题，大家尽情鄙视偶吧，最近就是背到家了。哦，目的带应该是200bp左右
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5楼2010-12-13 16:44:49
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
条带不集中的原因是胶浓度太小，浓度提高点会好点
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6楼2010-12-13 17:59:32
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hnndpt at 2010-12-13 17:59:32:
条带不集中的原因是胶浓度太小，浓度提高点会好点

谢谢呀，提醒我了，我的目的片段较小，按理也该稍微加大点浓度的。还有我的胶少上半部分为什么会较下部分亮呢，溶液应该是混匀了的。
还有，这是我再用引物对a分别对a、b、c三个样本进行了梯度退火，电泳图如下，不知道算不算有所改善？从右至左分别为Dl2000，（T1）空白，a引物对扩a样本T1、T2、T3，a引物对扩b样本T1、T2、T3，a引物对扩c样本T1、T2、T3。
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7楼2010-12-13 19:52:13
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)
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8楼2010-12-13 19:58:01
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by lhm_hnyj at 2010-12-13 19:52:13:

谢谢呀，提醒我了，我的目的片段较小，按理也该稍微加大点浓度的。还有我的胶少上半部分为什么会较下部分亮呢，溶液应该是混匀了的。
还有，这是我再用引物对a分别对a、b、c三个样本进行了梯度退火，电泳图如下 ...

胶上半部分比下半部分亮的原因：电泳时电压太高，EB朝正电荷方向移动，胶的下半部分的EB跑了，建议电压稍微低一点，多跑一会
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9楼2010-12-14 16:55:06
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hnndpt

铁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lhm_hnyj at 2010-12-13 19:58:01:

只从图的效果来看，这幅图比第一幅好点，但未提供具体改善的的手段等信息，不能判定体系是得到优化还是第一次操作的不好，所以不好下结论！
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10楼2010-12-14 16:57:09
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