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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物是否合适 已有4人参与

最近设计了三对引物Pa、Pb、Pc试着鉴别a、b、c三个种,采用相同的条件(50度退火)扩增了一次,得到的电泳图如下:右起为DL2000,引物Pc的空白,引物Pa分别扩增a、b、c,引物Pb分别扩增a、b、c,引物Pc分别扩增a、b、c。似乎仅C引物勉强为出现干扰,想请教大家有可能对扩增条件加以优化达到鉴别要求吗?这几对引物是否有希望派上用场呢
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

2楼2010-12-12 12:08:03
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恒星年

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这电泳图也太、、、、不清楚了,还有目的片段多大啊?
3楼2010-12-13 11:05:00
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amilie030312

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先电泳跑的就有问题,连M都那样了就重跑吧
4楼2010-12-13 13:39:04
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-12-13 13:39:04:
首先电泳跑的就有问题,连M都那样了就重跑吧

是太扩散了,顺便请教一下,最近的电泳也老出问题,总是不清楚。胶浓度0.8%,电泳液换过了,电泳条件90v,150mA。条带老集中不了,还有成像聚焦也没效果,不知道哪个环节出了问题,大家尽情鄙视偶吧,最近就是背到家了。哦,目的带应该是200bp左右
5楼2010-12-13 16:44:49
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hnndpt

铁虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
条带不集中的原因是胶浓度太小,浓度提高点会好点
6楼2010-12-13 17:59:32
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hnndpt at 2010-12-13 17:59:32:
条带不集中的原因是胶浓度太小,浓度提高点会好点

谢谢呀,提醒我了,我的目的片段较小,按理也该稍微加大点浓度的。还有我的胶少上半部分为什么会较下部分亮呢,溶液应该是混匀了的。
还有,这是我再用引物对a分别对a、b、c三个样本进行了梯度退火,电泳图如下,不知道算不算有所改善?从右至左分别为Dl2000,(T1)空白,a引物对扩a样本T1、T2、T3,a引物对扩b样本T1、T2、T3,a引物对扩c样本T1、T2、T3。
7楼2010-12-13 19:52:13
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lhm_hnyj

金虫 (小有名气)

8楼2010-12-13 19:58:01
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hnndpt

铁虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lhm_hnyj at 2010-12-13 19:52:13:

谢谢呀,提醒我了,我的目的片段较小,按理也该稍微加大点浓度的。还有我的胶少上半部分为什么会较下部分亮呢,溶液应该是混匀了的。
还有,这是我再用引物对a分别对a、b、c三个样本进行了梯度退火,电泳图如下 ...

胶上半部分比下半部分亮的原因:电泳时电压太高,EB朝正电荷方向移动,胶的下半部分的EB跑了,建议电压稍微低一点,多跑一会
9楼2010-12-14 16:55:06
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hnndpt

铁虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lhm_hnyj at 2010-12-13 19:58:01:

只从图的效果来看,这幅图比第一幅好点,但未提供具体改善的的手段等信息,不能判定体系是得到优化还是第一次操作的不好,所以不好下结论!
10楼2010-12-14 16:57:09
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