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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】生物样品中蛋白质怎样才能彻底的除干净啊
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ying_cheng

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】生物样品中蛋白质怎样才能彻底的除干净啊

有用无水乙醇除蛋白，但是似乎总是除的不够干净，有什么其他的更有效的方法吗？或者用的比例不对？
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1楼 2010-12-07 10:49:14
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1445118

至尊木虫 (正式写手)
一般用甲醇或乙腈沉淀蛋白，1:1
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2楼2010-12-07 11:54:49
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pfizer2001

金虫 (著名写手)
常规的用乙腈来沉淀蛋白的，而不是乙醇？而乙腈沉淀蛋白属于比较简单的步骤，更多可能会用SPE来做，你要首先研究你分析化合物的性质，以及基质的性质，尽可能的消除基质效应的影响！
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3楼2010-12-07 12:36:10
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scz1985

新虫 (初入文坛)
用有机试剂使蛋白变性，然后过滤沉淀吧，一般用甲醇、乙腈、乙醇
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4楼2010-12-07 12:55:52
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冰片

捐助贵宾 (著名写手)
甲醇沉淀肯定是可以的，但是内源性化合物的清除是需要看情况的。
如果是脏器或者组织的话，有两种建议：
1，加6%-8%的高氯酸溶液，优点是除的比较干净，但是样品本身的酸碱度和无机杂质度会有很大的变化，特别是对离子阱检测器的影响很大。
2.，SPE，这是最好的方法，但是对于SPE的选择是必须要注意的，往往是采用极性相反原则。此法的一个特点是定量应用时，对于方法学的考察难度较大。
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5楼2010-12-07 15:37:58
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wangfengjuan

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冰片 at 2010-12-07 15:37:58:
甲醇沉淀肯定是可以的，但是内源性化合物的清除是需要看情况的。
如果是脏器或者组织的话，有两种建议：
1，加6%-8%的高氯酸溶液，优点是除的比较干净，但是样品本身的酸碱度和无机杂质度会有很大的变化，特别是 ...

请问高氯酸对色谱柱的伤害是不是很大？
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6楼2010-12-11 10:41:26
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冰片

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by wangfengjuan at 2010-12-11 10:41:26:

请问高氯酸对色谱柱的伤害是不是很大？

当然要吹干啊，呵呵
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7楼2010-12-11 16:53:05
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platto

木虫 (著名写手)
ying_cheng(金币+4):效果如何还有待我的实验结果来验证，先派发金币吧 2010-12-13 14:48:03
除蛋白的方法很多的。除了上述以外，还有氯仿+正辛醇沉淀蛋白法，还有物理方法，如半透膜过滤等。
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8楼2010-12-12 12:20:39
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)
超滤啊，凝胶柱啊，效果不错。。。

之前除糖里的杂蛋白，含量太少了（紫外，电泳都无法检测），还没找到方法除去。。
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9楼2010-12-12 12:38:33
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ying_cheng

金虫 (小有名气)
内容已删除
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10楼2010-12-13 14:46:57
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ying_cheng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冰片 at 2010-12-11 16:53:05:

当然要吹干啊，呵呵

高氯酸可以用氮气吹干吗？怎么验证吹干了啊？有没有其他的方法啊？我要测的物质在酸性环境下不稳定呢
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11楼2010-12-13 14:49:05
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swt1898

铁虫 (著名写手)
SPE处理吧
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12楼2010-12-13 14:53:08
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waterish

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我试过将组织匀浆液进行SPE处理，氮气吹干后用甲醇复溶后进液相分析杂质可多了，峰形不好，怎么回事呢？
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13楼2012-04-09 23:21:55
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