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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接转化时遇到的奇怪问题 求解
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jerrity

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接转化时遇到的奇怪问题 求解

pcr片段胶回收后，双酶切，直接连接一个用同样的两种酶切的载体，转化感受态细胞JM109，在含卡那霉素的板上长出6个菌落，提质粒发现没有质粒，求解
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1楼 2010-12-06 15:06:10
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jerrity

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by magy2006 at 2010-12-06 15:37:28:
长出来的是杂菌，很正常，如果长出的都是阳性菌，何须检测？随便挑一个用就是了！
你的问题应该出在回收产物上（有没有回收到？）或者是转化上（热激？电击？），只要酶切的不错，总会长出来的，努力吧

回收产物 跑电泳了 没问题，用热激，42℃ 90s；杂菌也就算了，关键它还有抗性，这就让我想不明白了
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10楼2010-12-06 20:48:04
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jerrity

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by feng__ at 2010-12-06 15:20:24:
重新来····

已经做了两次了 想不明白 为什么没有治理 还有抗性
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3楼2010-12-06 15:21:44
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magy2006

木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-06 15:50:07
jerrity(金币+1): 2010-12-06 20:43:37
长出来的是杂菌，很正常，如果长出的都是阳性菌，何须检测？随便挑一个用就是了！
你的问题应该出在回收产物上（有没有回收到？）或者是转化上（热激？电击？），只要酶切的不错，总会长出来的，努力吧
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4楼2010-12-06 15:37:28
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-06 15:50:16
jerrity(金币+1): 2010-12-06 20:43:46
jerrity(金币+2): 2011-04-25 18:47:35
假阳性了，pcr产物直接酶切的效果总是不是很好，试试连到T载体上面再酶切吧，效果很好的！
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5楼2010-12-06 15:43:25
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