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phyllisguo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于等电聚焦电泳问题,不甚感激!! 已有4人参与

最近用伯乐111型等电聚焦电泳槽做IEF实验,想测试一下蛋白的等电点
可是几次实验,标准蛋白(pH3-10)的条带总是不能全部出现,只出现最明显的三条,其余的七八条都出不来,真是郁闷死了!
胶的配制和实验步骤我都是按111型IEF槽的说明来做的,
有没有虫子做过这方面的实验,可否给点建议,真是不甚感激呀
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phyllisguo

银虫 (小有名气)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by taotao4108 at 2010-12-03 14:13:15:
伯乐的等电聚焦我用过,不过是双向电泳的IEF,我用的都是伯乐的成品胶条。看楼主的意思,似乎IPG胶条是自己做的啊,很厉害!就我分析,如果你的胶条做的没有问题的话,应该是上样量和水化时间的问题,不知道你所用 ...

谢谢啊,可是我那个貌似没有什么主动水化被动水化呢,呃,也不需要什么缓冲液
3楼2010-12-03 15:40:41
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taotao4108

金虫 (正式写手)

无理

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):鼓励交流,欢迎 常来 2010-12-03 15:43:07
伯乐的等电聚焦我用过,不过是双向电泳的IEF,我用的都是伯乐的成品胶条。看楼主的意思,似乎IPG胶条是自己做的啊,很厉害!就我分析,如果你的胶条做的没有问题的话,应该是上样量和水化时间的问题,不知道你所用的111型等电聚焦电泳槽有没有主动水化和被动水化之分,如果有建议两种都试一下,然后再调整一下上样量。等电聚焦这种实验比较麻烦,影响因素也很多,建议多分析,多调整protocol,祝成功。
2楼2010-12-03 14:13:15
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sun1123moon

铜虫 (小有名气)

等电聚焦

楼主是不是自己制作凝胶的啊?能不能教一下怎么做啊?
4楼2011-02-25 16:03:28
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shusui

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
试一下换不同地方点样吧
5楼2011-09-04 12:07:46
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