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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】HPLC检测黄酮的问题
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陈陈小颖子

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】HPLC检测黄酮的问题

各位虫子们好！我最近在检测某植物的总黄酮提取液，刚开始摸索条件时都好好的，几种成分分离都还可以，图如下（主要是我框起来的那几个峰）：
四天后，同样的柱子，同样的流动相，总之就是所有条件不变，可是图像就成下面这样了:.难道是我的柱子柱效降低了吗？可是这根柱子就我一个人用过，才进样30次左右啊.....很是郁闷，请各位虫子们帮我分析分析原因，能提供解决办法就更好了！感谢大家了！最后，祝还在做实验的虫子实验顺利，已经毕业工作了的工作顺利，总之一切顺利，不要郁闷！（事事不顺真的难受，我现在就这样.....)

[ Last edited by 陈陈小颖子 on 2010-11-26 at 20:02 ]
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1楼 2010-11-26 19:56:46
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heyugudu

银虫 (正式写手)
陈陈小颖子(金币+2):我之前就确定好方法了，改变流动相基本不现实了 2010-11-27 21:27:50
我们最近也出现这种问题了，你确定流动相的比例没有变化么？如果是摸索试验的话，建议你换种流动相试一下．
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2楼2010-11-27 16:38:58
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drugmen

金虫 (正式写手)
陈陈小颖子(金币+2):梯度洗脱，安捷伦的柱子，最开始的10多次进样图形都是很好的，使用了柱温箱，每次使用完都会用95%水甲醇冲洗100分钟，因为我的流动相里面有冰醋酸 2010-11-27 21:31:10
什么方法？走梯度还是走等度？流动相是什么？比例？使用什么类型的色谱柱？是否使用柱温箱？每次实验结束后如何清洗色谱柱？
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3楼2010-11-27 18:04:46
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znmznm

金虫 (小有名气)
★
陈陈小颖子(金币+2):我的流动相每天都是现配的..... 2010-11-27 21:32:10
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-11-29 09:58:56
可能是柱子清洗的问题，也有可能流动相需要重新制备
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4楼2010-11-27 19:00:18
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yanghaowei

木虫 (小有名气)
陈陈小颖子(金币+1):但是我的样品处理方法基本上都是一模一样的啊.... 2010-11-27 21:33:08
可能是样品问题
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5楼2010-11-27 19:03:23
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juan1215225

金虫 (正式写手)
陈陈小颖子(金币+1):感谢参与 2010-11-28 21:56:06
用流动相，多冲冲柱子，应该是柱效降低的原因
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6楼2010-11-27 22:45:23
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znmznm

金虫 (小有名气)
★
陈陈小颖子(金币+1):感谢参与 2010-11-28 21:56:24
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-11-29 09:59:04
不一定是柱效的问题。关注细节问题：溶剂的配制、容器的清洗、样品的批号厂家、管子堵塞或清洗问题、检测方法稳定性、室温或柱温箱的稳定问题。
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7楼2010-11-28 09:26:40
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寒尘默默

木虫 (小有名气)
★
陈陈小颖子(金币+1):用预柱了，你的建议我会试试，呵呵呵 2010-11-28 21:57:25
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-11-29 09:59:14
1.用预柱没？柱效不好了，你可以先将预柱卸下，直接走一针,看看分离效果有没有改善。
2.用极性较大的流动相冲洗柱子几十分钟
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8楼2010-11-28 12:11:35
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jinronghua

至尊木虫 (知名作家)
陈陈小颖子(金币+1):感谢参与 2010-11-28 21:57:49
是不是流动相的组分改变了，你重新配制试试
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9楼2010-11-28 12:43:33
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drugmen

金虫 (正式写手)
★
陈陈小颖子(金币+4):我是为了做指纹图谱。我用的时间已经达到120分钟了，梯度变化也不能再慢了，否则时间会更久，我完全看懂你的意思了，那些道理我也都明白，哎，对于那几个不能分开的峰我也很无奈，要想得到完美的图谱实在是太难了，我这两天把柱温升高了5度，感觉效果又要好些了。总之谢谢你了，能看我的求助帖并帮我分析问题我就很感动了！！好人会有好报，呵呵呵 2010-11-28 22:03:30
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-11-29 09:59:26
实验的目的是什么？含量测定？还是鉴别（很少看到用HPLC做鉴别的）？
若是测定几个黄酮成分的总含量，第一张图也不能算是峰与峰分开了啊。第一张图的成分之间分离度是多少？若是刚好达到1.5，那么根据柱子使用的频率，是会出现第二张图的情况的。每次实验后的冲洗，是不能完全将柱子洁净程度达到跟原先一样的。冲洗柱子不够充分时，柱子寿命缩短寿命更快。植物样品成分多而复杂，柱子肯定是会受影响的。
如果不想改变原检测分析方法时，可微调流动相变化比例进行尝试。梯度，可在分析的目标成分的流动相比例适当调整。如：目标成分a在12min左右出峰，10——20min 流动相比例 A:B 20:80 可将此时适当调整，10——25min 流动相比例 A:B 20:80 或者调整流动相比例，不调整梯度时间，看看情况是否有变化。（不晓得我把意思说明白没，表达能力有点问题）
LZ的意思是要分开那几个峰吧？

个人看法，仅供参考。
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10楼2010-11-28 17:48:34
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Kim★God

金虫 (正式写手)
★
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-11-29 09:59:41
最后用的95%水甲醇洗柱子？是甲醇95%吗？应该用纯甲醇洗吧，如有有水的话，保存的时候会不会影响柱效啊！
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11楼2010-11-28 18:11:10
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wowowotan

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你用的柱子是一个新柱子吗，可能是柱子的分离度不好。
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12楼2011-08-02 22:48:23
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ljp666

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
karl2100(金币+1): 谢谢参与讨论！ 2011-08-09 23:01:11
1 样品浓度问题，是否过高
2 进样量的问题，是否过大
3 流动相问题，你的流动相PH值是否超出柱子范围，导致柱效降低，还有就是流动相配置的时候是否没有配好
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13楼2011-08-09 17:25:43
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古可ぷ

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
karl2100(金币+1): 多谢提供！ 2011-08-09 23:01:40
我觉得是柱子不够干净，冲柱的时候最好慢慢降低极性冲洗，因为柱子会因为有机溶剂收缩而导致冲不干净。
黄酮的话应该用70%甲醇做流动相，然后在慢慢降低甲醇的比例就行了吧，大概十几分钟就搞定了
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14楼2011-08-09 17:59:32
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ririwowo

禁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
15楼2011-08-09 20:03:38
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