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陈陈小颖子

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助】HPLC检测黄酮的问题

各位虫子们好！我最近在检测某植物的总黄酮提取液，刚开始摸索条件时都好好的，几种成分分离都还可以，图如下（主要是我框起来的那几个峰）：

四天后，同样的柱子，同样的流动相，总之就是所有条件不变，可是图像就成下面这样了:

.难道是我的柱子柱效降低了吗？可是这根柱子就我一个人用过，才进样30次左右啊.....很是郁闷，请各位虫子们帮我分析分析原因，能提供解决办法就更好了！感谢大家了！最后，祝还在做实验的虫子实验顺利，已经毕业工作了的工作顺利，总之一切顺利，不要郁闷！（事事不顺真的难受，我现在就这样.....)

[ Last edited by 陈陈小颖子 on 2010-11-26 at 20:02 ]

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1楼2010-11-26 19:56:46

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drugmen

金虫 (正式写手)

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虫号: 226651

★
陈陈小颖子(金币+4):我是为了做指纹图谱。我用的时间已经达到120分钟了，梯度变化也不能再慢了，否则时间会更久，我完全看懂你的意思了，那些道理我也都明白，哎，对于那几个不能分开的峰我也很无奈，要想得到完美的图谱实在是太难了，我这两天把柱温升高了5度，感觉效果又要好些了。总之谢谢你了，能看我的求助帖并帮我分析问题我就很感动了！！好人会有好报，呵呵呵 2010-11-28 22:03:30
qinhy(金币+1):多谢指教，欢迎常来药学版！ 2010-11-29 09:59:26

实验的目的是什么？含量测定？还是鉴别（很少看到用HPLC做鉴别的）？
若是测定几个黄酮成分的总含量，第一张图也不能算是峰与峰分开了啊。第一张图的成分之间分离度是多少？若是刚好达到1.5，那么根据柱子使用的频率，是会出现第二张图的情况的。每次实验后的冲洗，是不能完全将柱子洁净程度达到跟原先一样的。冲洗柱子不够充分时，柱子寿命缩短寿命更快。植物样品成分多而复杂，柱子肯定是会受影响的。
如果不想改变原检测分析方法时，可微调流动相变化比例进行尝试。梯度，可在分析的目标成分的流动相比例适当调整。如：目标成分a在12min左右出峰，10——20min 流动相比例 A:B 20:80 可将此时适当调整，10——25min 流动相比例 A:B 20:80 或者调整流动相比例，不调整梯度时间，看看情况是否有变化。（不晓得我把意思说明白没，表达能力有点问题）
LZ的意思是要分开那几个峰吧？

个人看法，仅供参考。