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yangqingfe

金虫 (初入文坛)

[求助] 黄酮类化合物的HPLC分析

花生衣中提取的黄酮类化合物，经液液萃取后（没过柱子，怕柱子会吸附一些物质）在高效液相上分离时，几个峰根本分不开，等度或者梯度都不行，流动相为甲醇－0.2％乙酸水，且出峰时间太快，3分钟左右，敬请各位帮忙分析一下
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1楼 2011-06-23 14:01:29
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峥岩

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
novus(金币+1): 谢谢交流，欢迎常来药学版！ 2011-06-23 16:09:15
你的样品提取的方法没有说明，很可能问题出在哪里，流动相的问题不太大
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幸福是我们对生活的一种态度
2楼2011-06-23 16:01:54
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半支烟5591

银虫 (正式写手)

专家

【答案】应助回帖

★
yangqingfe(金币+1): 谢谢，正考虑这个问题，但是我的东西本来极性就很大，加大了时间会不会更短？ 2011-06-23 17:41:00
xiaoxiao270(金币+1): 多谢应助 2011-12-14 17:37:43
用反相C18的话，把流动相极性加大，提高水的比例，出柱时间就长了
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3楼2011-06-23 16:46:48
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yangqingfe

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 峥岩 at 2011-06-23 16:01:54:
你的样品提取的方法没有说明，很可能问题出在哪里，流动相的问题不太大

对不住你了，不知道按了什么不知道怎么发金币了。
样品用微波辅助提取，溶剂为甲醇，样品没有过柱子，就是液液萃取纯化了一下，要的甲醇和乙酸乙酯部分，我想这应该能行的通，也许东西太多极性太相近了
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4楼2011-06-23 18:13:00
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鱼美人2012

新虫 (初入文坛)
★
xiaoxiao270(金币+1): 多谢应助 2011-12-14 17:37:58
你如果用的是C18的话，分离黄酮流动相的酸性是不是太弱了，我都用磷酸做流动相的。
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5楼2011-07-22 11:00:14
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破土草儿

木虫 (正式写手)
★ ★
karl2100(金币+1): 3Q 2011-07-22 20:14:16
xiaoxiao270(金币+1): 加大甲醇浓度么～～ 2011-12-14 17:39:52
引用回帖:
Originally posted by yangqingfe at 2011-06-23 14:01:29:
花生衣中提取的黄酮类化合物，经液液萃取后（没过柱子，怕柱子会吸附一些物质）在高效液相上分离时，几个峰根本分不开，等度或者梯度都不行，流动相为甲醇－0.2％乙酸水，且出峰时间太快，3分钟左右，敬请各位帮忙 ...

物质极性太大，开始梯度的时候（指3min以前），把甲醇的浓度加大，黄酮类成分分离技术一般比较成熟。可以下载一两篇黄酮类成分HPLC-DAD-ELSD方面的文章，里面的洗脱程序应该对你有帮助。
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6楼2011-07-22 18:35:48
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wwy_ghana

铁虫 (初入文坛)
★
xiaoxiao270(金币+1): 多谢应助 2011-12-14 17:39:07
hplc 说着容易 找原因很复杂  我建议你找个人带带你 你说的这种情况我觉得还是在样品处理上出了问题 因为本身液相仪说白了 常用的操作也就那么几种 找原因还应该在样品处理
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7楼2011-07-27 11:03:51
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lxpsdta

新虫 (初入文坛)
★
xiaoxiao270: 2011-12-14 17:40:05
xiaoxiao270(金币+1): 对 2011-12-14 17:40:14
我觉得问题还是出在流动相上，甲醇的比例低一些，出峰时间会变长，如果峰型差，流动相中可以加点酸。当然柱子也可能存在问题，如果柱子坏了，也起不到分离的效果了。
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8楼2011-12-14 17:31:52
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留级生2005

铁杆木虫 (著名写手)
★
novus(金币+1): 谢谢交流！ 2011-12-14 20:42:19
1.考虑柱子情况是否正常，柱温、基线情况。
2.提取时溶剂极性较大，分离纯化时对流动相极性需要试试，可以选择极性从小向大变化的几组实验，也可以考虑梯度洗脱。
3.可以先做做薄板摸摸基本条件，只从提取物极性角度分析对于液相很有帮助。
祝好运！！
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9楼2011-12-14 20:28:07
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