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【求助/交流】双酶切大问题
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大白菜123789
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虫号: 907458
[交流]
【求助/交流】双酶切大问题
兄弟姐妹们,近期本人正在构建干扰载体,可在做双酶切鉴定时,总是出现如下问题:
双酶切时,并没有目的片段(500)+大载体片段(13000)出现,反之,出现了三条大片段(>5000)!!!换了几对酶,都是如此的结果!想不通……
请各位大侠及有关部门,给予帮助,谢了……
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1楼
2010-11-25 21:35:50
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scelab
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大白菜123789(金币
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大白菜123789(金币+1): 2010-11-26 10:47:16
引用回帖:
Originally posted by
大白菜123789
at 2010-11-25 21:35:50:
兄弟姐妹们,近期本人正在构建干扰载体,可在做双酶切鉴定时,总是出现如下问题:
双酶切时,并没有目的片段(500)+大载体片段(13000)出现,反之,出现了三条大片段(>5000)!!!换了几对酶,都是如此的 ...
不明真相。。。
难道载体里有你不知道的酶切位点?因为好多质粒都有可能会用错的
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5楼
2010-11-25 23:20:48
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feiye2214
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大白菜123789(金币
+1
):谢谢参与
大白菜123789(金币+1): 2010-11-26 10:45:44
引用回帖:
Originally posted by
大白菜123789
at 2010-11-25 21:35:50:
兄弟姐妹们,近期本人正在构建干扰载体,可在做双酶切鉴定时,总是出现如下问题:
双酶切时,并没有目的片段(500)+大载体片段(13000)出现,反之,出现了三条大片段(>5000)!!!换了几对酶,都是如此的 ...
要不先用单酶切试试?
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2楼
2010-11-25 21:47:17
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大白菜123789(金币
+1
):谢谢参与
大白菜123789(金币+1): 2010-11-26 10:47:01
有没有认真检查插入序列和载体上的酶切位点啊,如果检查好了,那就排除用错酶。
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3楼
2010-11-25 21:50:37
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大白菜123789(金币+1): 2010-11-26 10:47:20
给你老板建议换gateway cloning。。。。。虽然花些钱但很简单。。。。
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6楼
2010-11-26 00:13:10
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