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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双酶切大问题
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大白菜123789

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】双酶切大问题

兄弟姐妹们，近期本人正在构建干扰载体，可在做双酶切鉴定时，总是出现如下问题：
双酶切时，并没有目的片段（500）+大载体片段（13000）出现，反之，出现了三条大片段（>5000）！！！换了几对酶，都是如此的结果!想不通……

请各位大侠及有关部门，给予帮助，谢了……
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1楼 2010-11-25 21:35:50
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米菲的旋律

木虫 (著名写手)
★
大白菜123789(金币+1):谢谢参与
大白菜123789(金币+1): 2010-11-26 10:47:01
有没有认真检查插入序列和载体上的酶切位点啊，如果检查好了，那就排除用错酶。
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3楼2010-11-25 21:50:37
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feiye2214

木虫 (正式写手)
★
大白菜123789(金币+1):谢谢参与
大白菜123789(金币+1): 2010-11-26 10:45:44
引用回帖:
Originally posted by 大白菜123789 at 2010-11-25 21:35:50:
兄弟姐妹们，近期本人正在构建干扰载体，可在做双酶切鉴定时，总是出现如下问题：
双酶切时，并没有目的片段（500）+大载体片段（13000）出现，反之，出现了三条大片段（>5000）！！！换了几对酶，都是如此的 ...

要不先用单酶切试试？
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2楼2010-11-25 21:47:17
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)
★
大白菜123789(金币+1):谢谢参与
大白菜123789(金币+1): 2010-11-26 10:47:16
引用回帖:
Originally posted by 大白菜123789 at 2010-11-25 21:35:50:
兄弟姐妹们，近期本人正在构建干扰载体，可在做双酶切鉴定时，总是出现如下问题：
双酶切时，并没有目的片段（500）+大载体片段（13000）出现，反之，出现了三条大片段（>5000）！！！换了几对酶，都是如此的 ...

不明真相。。。

难道载体里有你不知道的酶切位点？因为好多质粒都有可能会用错的
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5楼2010-11-25 23:20:48
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我是懒人

铁虫 (初入文坛)
★
大白菜123789(金币+1):谢谢参与
大白菜123789(金币+1): 2010-11-26 10:47:20
给你老板建议换gateway cloning。。。。。虽然花些钱但很简单。。。。
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6楼2010-11-26 00:13:10
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