版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4364)
>虫友互识 (1054)
>硕博家园 (1053)
>文献求助 (309)
>导师招生 (292)
>休闲灌水 (169)
>考博 (150)
>博后之家 (130)
>海外博后 (100)
>学术会议 (87)
>论文投稿 (86)
>招聘信息布告栏 (74)
>催化 (37)
>考研 (30)
>绿色求助(高悬赏) (27)
>基金申请 (22)

返回列表

weiminhb

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 161.8
帖子: 94
在线: 15.1小时
虫号: 831698

[交流] 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白表达问题

最近做绿色荧光蛋白的蛋白，将gfp基因转座到受体菌的基因组上，表达。证实gfp是插进去了的（有kan抗性筛选），第一次荧光显微镜检测是可以观察到荧光的，说明gfp表达了，但后来就观察不到了，怎么回事呢？是gfp表达不稳定吗?

回复此楼

» 猜你喜欢

KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有124人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性已经有0人回复
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点已经有0人回复
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记已经有0人回复
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2010-11-17 09:48:28

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-11-17 12:06:45

首先是卡那和GFP是同等地转座到基因组上，还是说分成两段分别插的？
如果是后者，只能说是筛到了具有耐药性质的菌株

这种外源插进去的东西会让基因组不稳定，复制的时候会丢失，所以要挑单克隆

赞一下(2人)

回复此楼

5楼2010-11-17 12:04:33

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

普通回帖

小乖小帅

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1756.2
帖子: 97
在线: 52.5小时
虫号: 980563

同样问题

我的是转到细胞里，看到绿色荧光蛋白了，所以做了共聚焦，结果就没有看到蛋白表达，也不知道是怎么回事

赞一下

回复此楼

2楼2010-11-17 11:05:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lxblxb9

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 4
帖子: 143
在线: 28.7小时
虫号: 1009619

引用回帖:

Originally posted by 小乖小帅 at 2010-11-17 11:05:02:
我的是转到细胞里，看到绿色荧光蛋白了，所以做了共聚焦，结果就没有看到蛋白表达，也不知道是怎么回事

我更不知道是怎么回事，
我只想知道你们谁能给我绿色荧光蛋白基因

赞一下

回复此楼

3楼2010-11-17 11:24:08

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

小乖小帅

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1756.2
帖子: 97
在线: 52.5小时
虫号: 980563

等我问清楚了再告诉你啊

引用回帖:

Originally posted by lxblxb9 at 2010-11-17 11:24:08:

我更不知道是怎么回事，
我只想知道你们谁能给我绿色荧光蛋白基因

我直接做了转染和筛选，前面的是老师设计的，我还不是很清楚，等我问清楚了再告诉你啊

赞一下

回复此楼

4楼2010-11-17 11:53:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

weiminhb

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 161.8
帖子: 94
在线: 15.1小时
虫号: 831698

引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-17 12:04:33:
首先是卡那和GFP是同等地转座到基因组上，还是说分成两段分别插的？
如果是后者，只能说是筛到了具有耐药性质的菌株

这种外源插进去的东西会让基因组不稳定，复制的时候会丢失，所以要挑单克隆

是一起插进去的。现在的问题是：将接合子在培养基中培养，培养基变绿了，但是取菌体荧光显微镜下观察，没有看到绿色荧光，而培养液变绿色了，现在准备做蛋白电泳，看看有没有GFP表达，有没有谁做过GFP表达的，GFP是胞内还是胞外的？

赞一下

回复此楼

6楼2010-11-30 15:03:56

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:

Originally posted by weiminhb at 2010-11-30 15:03:56:

是一起插进去的。现在的问题是：将接合子在培养基中培养，培养基变绿了，但是取菌体荧光显微镜下观察，没有看到绿色荧光，而培养液变绿色了，现在准备做蛋白电泳，看看有没有GFP表达，有没有谁做过GFP ...

是不是不小心在GFP加了个神马分泌的信号
另外有可能是你表达了毒蛋白，把宿主给杀了，所以……

赞一下

回复此楼

7楼2010-11-30 18:28:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖