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weiminhb

铁虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白表达问题

最近做绿色荧光蛋白的蛋白,将gfp基因转座到受体菌的基因组上,表达。证实gfp是插进去了的(有kan抗性筛选),第一次荧光显微镜检测是可以观察到荧光的,说明gfp表达了,但后来就观察不到了,怎么回事呢?是gfp表达不稳定吗?
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weiminhb

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-17 12:04:33:
首先是卡那和GFP是同等地转座到基因组上,还是说分成两段分别插的?
如果是后者,只能说是筛到了具有耐药性质的菌株

这种外源插进去的东西会让基因组不稳定,复制的时候会丢失,所以要挑单克隆

是一起插进去的。现在的问题是:将接合子在培养基中培养,培养基变绿了,但是取菌体荧光显微镜下观察,没有看到绿色荧光,而培养液变绿色了,现在准备做蛋白电泳,看看有没有GFP表达,有没有谁做过GFP表达的,GFP是胞内还是胞外的?
6楼2010-11-30 15:03:56
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小乖小帅

铁虫 (小有名气)


同样问题

我的是转到细胞里,看到绿色荧光蛋白了,所以做了共聚焦,结果就没有看到蛋白表达,也不知道是怎么回事
2楼2010-11-17 11:05:02
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lxblxb9

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 小乖小帅 at 2010-11-17 11:05:02:
我的是转到细胞里,看到绿色荧光蛋白了,所以做了共聚焦,结果就没有看到蛋白表达,也不知道是怎么回事

我更不知道是怎么回事,
我只想知道你们谁能给我绿色荧光蛋白基因
3楼2010-11-17 11:24:08
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小乖小帅

铁虫 (小有名气)


等我问清楚了再告诉你啊

引用回帖:
Originally posted by lxblxb9 at 2010-11-17 11:24:08:

我更不知道是怎么回事,
我只想知道你们谁能给我绿色荧光蛋白基因

我直接做了转染和筛选,前面的是老师设计的,我还不是很清楚,等我问清楚了再告诉你啊
4楼2010-11-17 11:53:20
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