应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白表达问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/1返回列表
查看: 2757  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白表达问题

最近做绿色荧光蛋白的蛋白，将gfp基因转座到受体菌的基因组上，表达。证实gfp是插进去了的（有kan抗性筛选），第一次荧光显微镜检测是可以观察到荧光的，说明gfp表达了，但后来就观察不到了，怎么回事呢？是gfp表达不稳定吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-17 09:48:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-11-17 12:06:45
首先是卡那和GFP是同等地转座到基因组上，还是说分成两段分别插的？
如果是后者，只能说是筛到了具有耐药性质的菌株

这种外源插进去的东西会让基因组不稳定，复制的时候会丢失，所以要挑单克隆
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-11-17 12:04:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

小乖小帅

铁虫 (小有名气)

同样问题

我的是转到细胞里，看到绿色荧光蛋白了，所以做了共聚焦，结果就没有看到蛋白表达，也不知道是怎么回事
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-17 11:05:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxblxb9

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 小乖小帅 at 2010-11-17 11:05:02:
我的是转到细胞里，看到绿色荧光蛋白了，所以做了共聚焦，结果就没有看到蛋白表达，也不知道是怎么回事

我更不知道是怎么回事，
我只想知道你们谁能给我绿色荧光蛋白基因
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-17 11:24:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小乖小帅

铁虫 (小有名气)

等我问清楚了再告诉你啊

引用回帖:
Originally posted by lxblxb9 at 2010-11-17 11:24:08:

我更不知道是怎么回事，
我只想知道你们谁能给我绿色荧光蛋白基因

我直接做了转染和筛选，前面的是老师设计的，我还不是很清楚，等我问清楚了再告诉你啊
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-17 11:53:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiminhb

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-11-17 12:04:33:
首先是卡那和GFP是同等地转座到基因组上，还是说分成两段分别插的？
如果是后者，只能说是筛到了具有耐药性质的菌株

这种外源插进去的东西会让基因组不稳定，复制的时候会丢失，所以要挑单克隆

是一起插进去的。现在的问题是：将接合子在培养基中培养，培养基变绿了，但是取菌体荧光显微镜下观察，没有看到绿色荧光，而培养液变绿色了，现在准备做蛋白电泳，看看有没有GFP表达，有没有谁做过GFP表达的，GFP是胞内还是胞外的？
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-30 15:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-11-30 15:03:56:

  
     是一起插进去的。现在的问题是：将接合子在培养基中培养，培养基变绿了，但是取菌体荧光显微镜下观察，没有看到绿色荧光，而培养液变绿色了，现在准备做蛋白电泳，看看有没有GFP表达，有没有谁做过GFP ...

是不是不小心在GFP加了个神马分泌的信号
另外有可能是你表达了毒蛋白，把宿主给杀了，所以……
赞一下 回复此楼
7楼2010-11-30 18:28:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

damaomao

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
8楼2012-04-24 11:12:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一点即通

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是有可能在传代过程中，绿色荧光蛋白基因从基因组中转座或是重组消失了？可以在不能检测到荧光的细胞中验证一下gfp基因的存在，仅供参考！
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-24 14:00:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emma立夏

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
还有一个原因，就是荧光淬灭。所以也有文献报导说，要加一些固定剂的。记得丙酮是一个很不错的固定剂。
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-11 20:32:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yili_90

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
将基因插入绿色荧光载体中，并转染进入293T细胞进行表达，48小时后观察细胞没有发现荧光，但重组载体测序正常，不知道什么原因
赞一下 回复此楼
11楼2014-03-24 22:39:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weiminhb 的主题更新
111/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华东理工085601材料工程303分求调剂 +5 a1708 2026-04-06 5/250 2026-04-06 22:21 by 来看流星雨10
[考研] 一志愿生物与医药，296分，求调剂 +11 66鹿 2026-04-03 13/650 2026-04-06 21:45 by 52305043001
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
[考研] 085600材料与化工301分求调剂院校 +16 刺痛jk 2026-04-06 17/850 2026-04-06 19:47 by 电池阿白
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +9 哇呼哼呼哼 2026-04-02 10/500 2026-04-06 19:47 by jean5056
[考研] 土木水利专硕276分求调剂 +3 我想上学！！6 2026-04-05 6/300 2026-04-06 18:51 by 我想上学！！6
[考研] 286求调剂 +12 Faune 2026-04-06 12/600 2026-04-06 17:40 by dongzh2009
[考研] 一志愿国科大信工所,英二数二408总分293分求调剂 +3 ilcyuan 2026-04-02 4/200 2026-04-06 16:35 by likeihood
[考研] 301求调剂 +13 121. 2026-04-04 13/650 2026-04-06 14:20 by lqwchd
[考研] 材料求调剂 +14 一样YWY 2026-04-05 14/700 2026-04-06 14:09 by lqwchd
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 081700学硕，323分，一志愿中国海洋大学求调剂学校 +16 披星河 2026-04-04 16/800 2026-04-05 11:27 by 猪会飞
[考研] 353求调剂 +10 MayUxw1 2026-04-03 10/500 2026-04-05 09:23 by 无际的草原
[考研] 求生物学调剂 +14 15172915737 2026-04-01 14/700 2026-04-04 20:13 by babysonlkd
[考研] 求调剂 +3 农业工程与信息� 2026-04-04 3/150 2026-04-04 12:19 by 舍而后得
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +5 蓝笺片 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:37 by dongzh2009
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 08工科求调剂290分 +5 1314捧花 2026-04-02 8/400 2026-04-02 13:16 by 乔哒哒哒
[考研] 314求调剂 +11 1xiaojun23 2026-03-31 12/600 2026-04-02 12:31 by 1xiaojun23
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭