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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白表达问题
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weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白表达问题

最近做绿色荧光蛋白的蛋白，将gfp基因转座到受体菌的基因组上，表达。证实gfp是插进去了的（有kan抗性筛选），第一次荧光显微镜检测是可以观察到荧光的，说明gfp表达了，但后来就观察不到了，怎么回事呢？是gfp表达不稳定吗?
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1楼2010-11-17 09:48:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-11-17 12:06:45
首先是卡那和GFP是同等地转座到基因组上，还是说分成两段分别插的？
如果是后者，只能说是筛到了具有耐药性质的菌株

这种外源插进去的东西会让基因组不稳定，复制的时候会丢失，所以要挑单克隆
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5楼2010-11-17 12:04:33
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by weiminhb at 2010-11-30 15:03:56:

  
     是一起插进去的。现在的问题是：将接合子在培养基中培养，培养基变绿了，但是取菌体荧光显微镜下观察，没有看到绿色荧光，而培养液变绿色了，现在准备做蛋白电泳，看看有没有GFP表达，有没有谁做过GFP ...

是不是不小心在GFP加了个神马分泌的信号
另外有可能是你表达了毒蛋白，把宿主给杀了，所以……
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7楼2010-11-30 18:28:18
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