应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR引物
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1076  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lilirong2009

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR引物



如图，我用手工设计了金黄色葡萄球菌ATCC6538总DNA中几种基因的引物，只有一种引物P出了基因，此种基因长度为2000多个bp,但是我手工设计的引物理论上应调取中间200bp的片段，但是通过marker比对看，P出来的是500-700bp间的片段，请问是什么原因? 另外，手工设计的其他几种引物都没有P出东西来,只能很模糊的看到引物二聚体，是什么原因啊？
  注：因为金黄色葡萄球菌ATCC6538的这几种基因并不能全部在genebank中找到，所以我通过blast和clustalW2 比对了几种金黄色葡萄球菌的基因，找出其中保守序列后用primer premier 5 手工设计的长度都为18bp的引物，引物公司合成后给的Tm大多为40多度。我退火温度设计了梯度温度为40-55℃，但是只有一种引物P出了基因，但基因长度不是预设的长度。到底是什么原因啊？
    多谢指教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-15 17:14:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

磊leisure

金虫 (小有名气)
退火温度设置的很重要，你重新设置一下PCR反应体系吧
赞一下 回复此楼
4楼2010-11-21 09:45:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

hong303030

金虫 (小有名气)
lilirong2009(金币+1): 2010-11-16 08:40:59
引用回帖:
Originally posted by lilirong2009 at 2010-11-15 17:14:13:


如图，我用手工设计了金黄色葡萄球菌ATCC6538总DNA中几种基因的引物，只有一种引物P出了基因，此种基因长度为2000多个bp,但是我手工设计的引物理 ...

以前我也遇到过这种问题，可以优化一下PCR体系，还有PCR的扩增程序，以前普通程序扩不出来，我用touchdown的程序扩出来了，还就是你可以换一下扩增用的酶，试一下
赞一下 回复此楼
2楼2010-11-15 18:45:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gagalady

新虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):感谢交流 2010-11-15 19:00:35
引物二聚体的存在 就说明 引物没用上
引物的Tm值是40多   你的退火温度应该比它低呀 怎么着也得低5度呀
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-11-15 18:56:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 工科08专硕机械275求调剂 +3 AaAa7420 2026-04-02 3/150 2026-04-05 13:26 by jp9609
[考研] 一志愿江南大学085501机械工程专硕326分，本科佳木斯大学 +5 顾若浮生 2026-04-03 9/450 2026-04-05 09:57 by 1753564080
[考研] 材料334求调剂 +15 Eecho# 2026-04-03 15/750 2026-04-04 23:05 by 无际的草原
[考研] 349求调剂 +11 zwjjjjjj 2026-03-31 11/550 2026-04-04 19:52 by 蓝云思雨
[考研] [调剂信息]085408光电信息 求调剂 总分291分数一英一 +3 iz11az 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:09 by 蓝云思雨
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 求调剂 +3 农业工程与信息� 2026-04-04 3/150 2026-04-04 12:19 by 舍而后得
[考研] 化学调剂求助 +6 LULONG1 2026-04-03 6/300 2026-04-03 23:13 by qzxyhcsy
[考研] 311求调剂 +20 zchqwer 2026-04-01 22/1100 2026-04-03 22:09 by lglzsd
[考研] 兽医调剂 +3 wh119216 2026-04-02 3/150 2026-04-03 19:34 by zrongyan
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +3 蓝笺片 2026-04-03 4/200 2026-04-03 17:58 by Jimmyandyou
[考研] 材料考研调剂 +10 Gs大王 2026-04-02 10/500 2026-04-03 09:47 by 遗忘消失的灆
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 285求调剂 +8 AZMK 2026-04-02 11/550 2026-04-02 20:16 by yulian1987
[考研] 能源动力 调剂 +3 不破不立0 2026-04-02 3/150 2026-04-02 12:46 by ffffjjjj
[考研] 生物学327，求调剂 +5 书上的梅子 2026-04-01 6/300 2026-04-02 06:47 by ilovexiaobin
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 22:04 by 客尔美德
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
[考研] 254材料与化工求调剂 +3 翰冬林楠 2026-03-30 4/200 2026-03-31 17:53 by yishunmin
[考研] 083000环境科学与工程调剂，总分281 +4 橙子（胜意） 2026-03-30 4/200 2026-03-31 00:44 by Linzejun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭