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【求助/交流】PCR引物
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 如图，我用手工设计了金黄色葡萄球菌ATCC6538总DNA中几种基因的引物，只有一种引物P出了基因，此种基因长度为2000多个bp,但是我手工设计的引物理论上应调取中间200bp的片段，但是通过marker比对看，P出来的是500-700bp间的片段，请问是什么原因? 另外，手工设计的其他几种引物都没有P出东西来,只能很模糊的看到引物二聚体，是什么原因啊？ 注：因为金黄色葡萄球菌ATCC6538的这几种基因并不能全部在genebank中找到，所以我通过blast和clustalW2 比对了几种金黄色葡萄球菌的基因，找出其中保守序列后用primer premier 5 手工设计的长度都为18bp的引物，引物公司合成后给的Tm大多为40多度。我退火温度设计了梯度温度为40-55℃，但是只有一种引物P出了基因，但基因长度不是预设的长度。到底是什么原因啊？ 多谢指教！ |
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