24小时热门版块排行榜    

查看: 1355  |  回复: 6

jackiechubut

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】干扰载体

构建的干扰表达载体转入模式生物中(拟南芥,烟草),northern检测是否可以检测到dsRNA的存在?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

randomqd

木虫 (小有名气)


干扰表达载体?

★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流。 2010-11-09 08:34:11
jackiechubut(金币+1): 2010-11-09 10:10:51
干扰RNA表达载体的表达沉默dsRNA,是要检测被沉默的dsRNA吗?
如果你设计的siRNA干扰序列合理的话,一般干扰的效率都是很高的。
当然也不会是100%,
看你想要的结果,应该是会留下一点痕迹的。
关键还是看你做杂交的背景了。
2楼2010-11-09 08:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechubut

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 08:28:10:
干扰RNA表达载体的表达沉默dsRNA,是要检测被沉默的dsRNA吗?
如果你设计的siRNA干扰序列合理的话,一般干扰的效率都是很高的。
当然也不会是100%,
看你想要的结果,应该是会留下一点痕迹的。
关键还是看你做 ...

我做的是在植物体内表达外源基因的干扰载体,所以想知道能否在转基因植物中检测到dsRNA,还是只能检测到小RNA的存在?
3楼2010-11-09 10:10:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

randomqd

木虫 (小有名气)


应该是检测到siRNA

★ ★ ★
dhd997(金币+3):good 2010-11-09 16:52:23
jackiechubut(金币+1): 2010-11-09 17:04:06
没看懂你说的是转基因植物,还是干扰后的转基因植物。
建议看一下植物的沉默机制。
找几篇有关基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章:比如在GFP转基因植物中瞬时表达外源基因转进去外源GFP,产生的siRNA会抑制掉外源的GFP表达,也抑制内源的表达。
但是就算是抑制掉GFP也会有浅浅的一条带吧。
本来嘛杂交就是定性的。
抑制GFP的表达,但是体内GFP的siRNA应该是会很浓。。。
至于说dsRNA。。。只能有些基因里有报道。。。
因为小一点的dsRNA 50-200bp的也有可能沉默基因的
我说得乱乱的。。。
没看懂你说的稳定的转基因植物还是瞬时沉默的植物
祝好运

[ Last edited by randomqd on 2010-11-9 at 16:30 ]
4楼2010-11-09 16:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechubut

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 16:28:21:
没看懂你说的是转基因植物,还是干扰后的转基因植物。
建议看一下植物的沉默机制。
找几篇有关基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章:比如在GFP转基因植物中瞬时表达外源基因转进去外源GFP,产生 ...

我做的是利用这个机理来抗虫,所以设计了干扰载体,干扰片段是昆虫体内的。转入烟草和拟南芥中进行抗虫实验,想知道这样获得的转基因烟草体内是否可以检测到dsRNA的存在
5楼2010-11-09 17:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

randomqd

木虫 (小有名气)


你这个应该是瞬时沉默吧

外源RNA进来被沉默后,应该是很微量的,杂交能不能出条带就不晓得了,
虽然没做过用昆虫做载体的,但是外源DSRNA进来估计是要被沉默的。
但是没做过。没发言权。
6楼2010-11-09 19:14:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechubut

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 19:14:46:
外源RNA进来被沉默后,应该是很微量的,杂交能不能出条带就不晓得了,
虽然没做过用昆虫做载体的,但是外源DSRNA进来估计是要被沉默的。
但是没做过。没发言权。

干扰载体表达了的话在RNA水平上开始就是产生dsRNA,但是不知道是否能够检测到,因为之后就会生成小RNA
7楼2010-11-09 19:19:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jackiechubut 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 08:29 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 XJXMuRjD7cK7 2026-11-13 4/200 2026-11-15 07:12 by xSrQNSSjcgoX
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-13 3/150 2026-11-15 04:38 by xSrQNSSjcgoX
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 7/350 2026-11-15 03:43 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 27博士 +6 锦鲤送福至 2026-11-10 6/300 2026-11-14 21:23 by xupeii
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 czAiolzR0IJC 2026-11-10 6/300 2026-11-12 16:55 by zzy933268
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 13:02 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 6/300 2026-11-12 12:42 by ECLTXnJnRSXf
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:33 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-12 10:03 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 11/550 2026-11-12 09:57 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-12 09:52 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:32 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 9/450 2026-11-12 09:24 by HajghKOMynmz
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 gRND4NVAZ8VG 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:42 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:36 by 9fOTqj074tIg
信息提示
请填处理意见