24小时热门版块排行榜    

查看: 1163  |  回复: 6

jackiechubut

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】干扰载体

构建的干扰表达载体转入模式生物中(拟南芥,烟草),northern检测是否可以检测到dsRNA的存在?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

randomqd

木虫 (小有名气)


干扰表达载体?

★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流。 2010-11-09 08:34:11
jackiechubut(金币+1): 2010-11-09 10:10:51
干扰RNA表达载体的表达沉默dsRNA,是要检测被沉默的dsRNA吗?
如果你设计的siRNA干扰序列合理的话,一般干扰的效率都是很高的。
当然也不会是100%,
看你想要的结果,应该是会留下一点痕迹的。
关键还是看你做杂交的背景了。
2楼2010-11-09 08:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechubut

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 08:28:10:
干扰RNA表达载体的表达沉默dsRNA,是要检测被沉默的dsRNA吗?
如果你设计的siRNA干扰序列合理的话,一般干扰的效率都是很高的。
当然也不会是100%,
看你想要的结果,应该是会留下一点痕迹的。
关键还是看你做 ...

我做的是在植物体内表达外源基因的干扰载体,所以想知道能否在转基因植物中检测到dsRNA,还是只能检测到小RNA的存在?
3楼2010-11-09 10:10:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

randomqd

木虫 (小有名气)


应该是检测到siRNA

★ ★ ★
dhd997(金币+3):good 2010-11-09 16:52:23
jackiechubut(金币+1): 2010-11-09 17:04:06
没看懂你说的是转基因植物,还是干扰后的转基因植物。
建议看一下植物的沉默机制。
找几篇有关基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章:比如在GFP转基因植物中瞬时表达外源基因转进去外源GFP,产生的siRNA会抑制掉外源的GFP表达,也抑制内源的表达。
但是就算是抑制掉GFP也会有浅浅的一条带吧。
本来嘛杂交就是定性的。
抑制GFP的表达,但是体内GFP的siRNA应该是会很浓。。。
至于说dsRNA。。。只能有些基因里有报道。。。
因为小一点的dsRNA 50-200bp的也有可能沉默基因的
我说得乱乱的。。。
没看懂你说的稳定的转基因植物还是瞬时沉默的植物
祝好运

[ Last edited by randomqd on 2010-11-9 at 16:30 ]
4楼2010-11-09 16:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechubut

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 16:28:21:
没看懂你说的是转基因植物,还是干扰后的转基因植物。
建议看一下植物的沉默机制。
找几篇有关基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章:比如在GFP转基因植物中瞬时表达外源基因转进去外源GFP,产生 ...

我做的是利用这个机理来抗虫,所以设计了干扰载体,干扰片段是昆虫体内的。转入烟草和拟南芥中进行抗虫实验,想知道这样获得的转基因烟草体内是否可以检测到dsRNA的存在
5楼2010-11-09 17:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

randomqd

木虫 (小有名气)


你这个应该是瞬时沉默吧

外源RNA进来被沉默后,应该是很微量的,杂交能不能出条带就不晓得了,
虽然没做过用昆虫做载体的,但是外源DSRNA进来估计是要被沉默的。
但是没做过。没发言权。
6楼2010-11-09 19:14:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechubut

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 19:14:46:
外源RNA进来被沉默后,应该是很微量的,杂交能不能出条带就不晓得了,
虽然没做过用昆虫做载体的,但是外源DSRNA进来估计是要被沉默的。
但是没做过。没发言权。

干扰载体表达了的话在RNA水平上开始就是产生dsRNA,但是不知道是否能够检测到,因为之后就会生成小RNA
7楼2010-11-09 19:19:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jackiechubut 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 3/150 2026-03-18 00:13 by PY-Hzb
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +3 脱颖而出 2026-03-16 6/300 2026-03-17 21:19 by z1z2z3879
[考研] 341求调剂 +5 捣蛋猪猪 2026-03-11 7/350 2026-03-17 19:09 by 捣蛋猪猪
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 085600材料与化工求调剂 +5 绪幸与子 2026-03-17 5/250 2026-03-17 16:40 by laoshidan
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 289求调剂 +6 步川酷紫123 2026-03-11 6/300 2026-03-17 10:23 by Sammy2
[考研] 一志愿华中师范071000,325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123! 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
请填处理意见