应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】干扰载体
71/1返回列表
查看: 1268  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jackiechubut

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】干扰载体

构建的干扰表达载体转入模式生物中（拟南芥，烟草），northern检测是否可以检测到dsRNA的存在？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-11-08 22:22:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

randomqd

木虫 (小有名气)

干扰表达载体？

★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流。 2010-11-09 08:34:11
jackiechubut(金币+1): 2010-11-09 10:10:51
干扰RNA表达载体的表达沉默dsRNA，是要检测被沉默的dsRNA吗？
如果你设计的siRNA干扰序列合理的话，一般干扰的效率都是很高的。
当然也不会是100%，
看你想要的结果，应该是会留下一点痕迹的。
关键还是看你做杂交的背景了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-11-09 08:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechubut

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 08:28:10:
干扰RNA表达载体的表达沉默dsRNA，是要检测被沉默的dsRNA吗？
如果你设计的siRNA干扰序列合理的话，一般干扰的效率都是很高的。
当然也不会是100%，
看你想要的结果，应该是会留下一点痕迹的。
关键还是看你做 ...

我做的是在植物体内表达外源基因的干扰载体，所以想知道能否在转基因植物中检测到dsRNA，还是只能检测到小RNA的存在？
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-09 10:10:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

randomqd

木虫 (小有名气)

应该是检测到siRNA

★ ★ ★
dhd997(金币+3):good 2010-11-09 16:52:23
jackiechubut(金币+1): 2010-11-09 17:04:06
没看懂你说的是转基因植物，还是干扰后的转基因植物。
建议看一下植物的沉默机制。
找几篇有关基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章：比如在GFP转基因植物中瞬时表达外源基因转进去外源GFP，产生的siRNA会抑制掉外源的GFP表达，也抑制内源的表达。
但是就算是抑制掉GFP也会有浅浅的一条带吧。
本来嘛杂交就是定性的。
抑制GFP的表达，但是体内GFP的siRNA应该是会很浓。。。
至于说dsRNA。。。只能有些基因里有报道。。。
因为小一点的dsRNA 50-200bp的也有可能沉默基因的
我说得乱乱的。。。
没看懂你说的稳定的转基因植物还是瞬时沉默的植物
祝好运

[ Last edited by randomqd on 2010-11-9 at 16:30 ]
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-11-09 16:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechubut

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 16:28:21:
没看懂你说的是转基因植物，还是干扰后的转基因植物。
建议看一下植物的沉默机制。
找几篇有关基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章：比如在GFP转基因植物中瞬时表达外源基因转进去外源GFP，产生 ...

我做的是利用这个机理来抗虫，所以设计了干扰载体，干扰片段是昆虫体内的。转入烟草和拟南芥中进行抗虫实验，想知道这样获得的转基因烟草体内是否可以检测到dsRNA的存在
赞一下 回复此楼
5楼2010-11-09 17:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

randomqd

木虫 (小有名气)

你这个应该是瞬时沉默吧

外源RNA进来被沉默后，应该是很微量的，杂交能不能出条带就不晓得了，
虽然没做过用昆虫做载体的，但是外源DSRNA进来估计是要被沉默的。
但是没做过。没发言权。
赞一下 回复此楼
6楼2010-11-09 19:14:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackiechubut

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 19:14:46:
外源RNA进来被沉默后，应该是很微量的，杂交能不能出条带就不晓得了，
虽然没做过用昆虫做载体的，但是外源DSRNA进来估计是要被沉默的。
但是没做过。没发言权。

干扰载体表达了的话在RNA水平上开始就是产生dsRNA，但是不知道是否能够检测到，因为之后就会生成小RNA
赞一下 回复此楼
7楼2010-11-09 19:19:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jackiechubut 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭