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jackiechubut

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】干扰载体

构建的干扰表达载体转入模式生物中（拟南芥，烟草），northern检测是否可以检测到dsRNA的存在？
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1楼 2010-11-08 22:22:00
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randomqd

木虫 (小有名气)

干扰表达载体？

★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流。 2010-11-09 08:34:11
jackiechubut(金币+1): 2010-11-09 10:10:51
干扰RNA表达载体的表达沉默dsRNA，是要检测被沉默的dsRNA吗？
如果你设计的siRNA干扰序列合理的话，一般干扰的效率都是很高的。
当然也不会是100%，
看你想要的结果，应该是会留下一点痕迹的。
关键还是看你做杂交的背景了。
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2楼2010-11-09 08:28:10
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jackiechubut

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 08:28:10:
干扰RNA表达载体的表达沉默dsRNA，是要检测被沉默的dsRNA吗？
如果你设计的siRNA干扰序列合理的话，一般干扰的效率都是很高的。
当然也不会是100%，
看你想要的结果，应该是会留下一点痕迹的。
关键还是看你做 ...

我做的是在植物体内表达外源基因的干扰载体，所以想知道能否在转基因植物中检测到dsRNA，还是只能检测到小RNA的存在？
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3楼2010-11-09 10:10:40
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randomqd

木虫 (小有名气)

应该是检测到siRNA

★ ★ ★
dhd997(金币+3):good 2010-11-09 16:52:23
jackiechubut(金币+1): 2010-11-09 17:04:06
没看懂你说的是转基因植物，还是干扰后的转基因植物。
建议看一下植物的沉默机制。
找几篇有关基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章：比如在GFP转基因植物中瞬时表达外源基因转进去外源GFP，产生的siRNA会抑制掉外源的GFP表达，也抑制内源的表达。
但是就算是抑制掉GFP也会有浅浅的一条带吧。
本来嘛杂交就是定性的。
抑制GFP的表达，但是体内GFP的siRNA应该是会很浓。。。
至于说dsRNA。。。只能有些基因里有报道。。。
因为小一点的dsRNA 50-200bp的也有可能沉默基因的
我说得乱乱的。。。
没看懂你说的稳定的转基因植物还是瞬时沉默的植物
祝好运

[ Last edited by randomqd on 2010-11-9 at 16:30 ]
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4楼2010-11-09 16:28:21
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jackiechubut

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 16:28:21:
没看懂你说的是转基因植物，还是干扰后的转基因植物。
建议看一下植物的沉默机制。
找几篇有关基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章：比如在GFP转基因植物中瞬时表达外源基因转进去外源GFP，产生 ...

我做的是利用这个机理来抗虫，所以设计了干扰载体，干扰片段是昆虫体内的。转入烟草和拟南芥中进行抗虫实验，想知道这样获得的转基因烟草体内是否可以检测到dsRNA的存在
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5楼2010-11-09 17:17:10
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randomqd

木虫 (小有名气)

你这个应该是瞬时沉默吧

外源RNA进来被沉默后，应该是很微量的，杂交能不能出条带就不晓得了，
虽然没做过用昆虫做载体的，但是外源DSRNA进来估计是要被沉默的。
但是没做过。没发言权。
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6楼2010-11-09 19:14:46
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jackiechubut

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 19:14:46:
外源RNA进来被沉默后，应该是很微量的，杂交能不能出条带就不晓得了，
虽然没做过用昆虫做载体的，但是外源DSRNA进来估计是要被沉默的。
但是没做过。没发言权。

干扰载体表达了的话在RNA水平上开始就是产生dsRNA，但是不知道是否能够检测到，因为之后就会生成小RNA
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7楼2010-11-09 19:19:17
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