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jackiechubut

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】干扰载体

构建的干扰表达载体转入模式生物中(拟南芥,烟草),northern检测是否可以检测到dsRNA的存在?
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randomqd

木虫 (小有名气)


干扰表达载体?

★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流。 2010-11-09 08:34:11
jackiechubut(金币+1): 2010-11-09 10:10:51
干扰RNA表达载体的表达沉默dsRNA,是要检测被沉默的dsRNA吗?
如果你设计的siRNA干扰序列合理的话,一般干扰的效率都是很高的。
当然也不会是100%,
看你想要的结果,应该是会留下一点痕迹的。
关键还是看你做杂交的背景了。
2楼2010-11-09 08:28:10
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jackiechubut

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 08:28:10:
干扰RNA表达载体的表达沉默dsRNA,是要检测被沉默的dsRNA吗?
如果你设计的siRNA干扰序列合理的话,一般干扰的效率都是很高的。
当然也不会是100%,
看你想要的结果,应该是会留下一点痕迹的。
关键还是看你做 ...

我做的是在植物体内表达外源基因的干扰载体,所以想知道能否在转基因植物中检测到dsRNA,还是只能检测到小RNA的存在?
3楼2010-11-09 10:10:40
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randomqd

木虫 (小有名气)


应该是检测到siRNA

★ ★ ★
dhd997(金币+3):good 2010-11-09 16:52:23
jackiechubut(金币+1): 2010-11-09 17:04:06
没看懂你说的是转基因植物,还是干扰后的转基因植物。
建议看一下植物的沉默机制。
找几篇有关基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章:比如在GFP转基因植物中瞬时表达外源基因转进去外源GFP,产生的siRNA会抑制掉外源的GFP表达,也抑制内源的表达。
但是就算是抑制掉GFP也会有浅浅的一条带吧。
本来嘛杂交就是定性的。
抑制GFP的表达,但是体内GFP的siRNA应该是会很浓。。。
至于说dsRNA。。。只能有些基因里有报道。。。
因为小一点的dsRNA 50-200bp的也有可能沉默基因的
我说得乱乱的。。。
没看懂你说的稳定的转基因植物还是瞬时沉默的植物
祝好运

[ Last edited by randomqd on 2010-11-9 at 16:30 ]
4楼2010-11-09 16:28:21
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jackiechubut

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 16:28:21:
没看懂你说的是转基因植物,还是干扰后的转基因植物。
建议看一下植物的沉默机制。
找几篇有关基因沉默的文章
植物沉默抑制子的也可以
有好多文章:比如在GFP转基因植物中瞬时表达外源基因转进去外源GFP,产生 ...

我做的是利用这个机理来抗虫,所以设计了干扰载体,干扰片段是昆虫体内的。转入烟草和拟南芥中进行抗虫实验,想知道这样获得的转基因烟草体内是否可以检测到dsRNA的存在
5楼2010-11-09 17:17:10
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randomqd

木虫 (小有名气)


你这个应该是瞬时沉默吧

外源RNA进来被沉默后,应该是很微量的,杂交能不能出条带就不晓得了,
虽然没做过用昆虫做载体的,但是外源DSRNA进来估计是要被沉默的。
但是没做过。没发言权。
6楼2010-11-09 19:14:46
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jackiechubut

木虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by randomqd at 2010-11-09 19:14:46:
外源RNA进来被沉默后,应该是很微量的,杂交能不能出条带就不晓得了,
虽然没做过用昆虫做载体的,但是外源DSRNA进来估计是要被沉默的。
但是没做过。没发言权。

干扰载体表达了的话在RNA水平上开始就是产生dsRNA,但是不知道是否能够检测到,因为之后就会生成小RNA
7楼2010-11-09 19:19:17
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