应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教：引物设计的酶切位点等是否计算入Tm中?
121/2返回列表12下一页
查看: 2083  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 honglix 的 31 个金币

honglix

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教：引物设计的酶切位点等是否计算入Tm中?

请教高手，设计引物时5‘端加的酶切位点等是否在计算Tm时需要计入？上下游引物碱基个数不能相差太多，但是加入5’端的连接子酶切位点等在计算上下游碱基个数差别时是否计入？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2010-10-22 10:02:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
honglix(金币+5): 2010-10-22 19:43:42
计算Tm看与互补配对的碱基个数
赞一下 回复此楼
2楼2010-10-22 10:05:43
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-22 10:09:51
honglix(金币+5): 2010-10-22 19:44:18
我习惯分两步
前面是只考虑互补的，大概跑8~10个循环，后面的就考虑酶切位点，提高退火温度
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-10-22 10:07:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
honglix(金币+1): 2010-10-22 19:44:27
我没有算也，扩增没问题
赞一下 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2010-10-22 13:00:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟
★
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-10-22 18:55:00
honglix(金币+3): 2010-10-22 19:45:34
本人从来不计算TM值，设计引物都是直接手写，扩增200-3000片段全部没得问题。SOE-PCR也没的问题，就是直接融合5个片段也没的问题，设计的中间融合引物都是50bp，跟30bp的一起扩增，刚刚的。
本人粗略觉得退火温度只与目的菌株的GC含量等有关
赞一下(1人) 回复此楼
独YY不如众YY！！！
5楼2010-10-22 13:19:35
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taigongzaici

新虫 (小有名气)
honglix(金币+1): 2010-10-22 19:45:45
呵呵，应该看一下的，应该算进去的，不出问题一切都好，要是有问题，就不好说了
赞一下 回复此楼
6楼2010-10-22 14:56:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)
honglix(金币+1): 2010-10-22 19:45:53
我算进去了 扩增300左右的，没有问题
赞一下 回复此楼
7楼2010-10-22 15:56:13
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
honglix(金币+1): 2010-10-22 19:45:58
不计入。 退火只看配对的键值
赞一下 回复此楼
8楼2010-10-22 16:03:03
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xulanzzz

木虫 (著名写手)
honglix(金币+1): 2010-10-22 19:46:03
计算Tm时不用考虑酶切位点。。
赞一下 回复此楼
DOBEST
9楼2010-10-22 16:19:50
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
honglix(金币+1): 2010-10-22 19:46:12
做个梯度PCR，肯定没问题了
赞一下 回复此楼
严于律己，宽以待人
10楼2010-10-22 17:07:32
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 honglix 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 自己找博士可真难啊 +8 鸡腿啦啦啦 2024-12-23 14/700 2024-12-23 22:17 by Andy_124
[教师之家] 咨询一下，是不是教授之间比较忌讳谈论文造假，因为可能很多人都是造假 +9 akslis2024 2024-12-21 10/500 2024-12-23 20:46 by zeolitess
[硕博家园] 只想摆烂 +8 s150535912 2024-12-23 13/650 2024-12-23 20:20 by wjykycg
[论文投稿] International Journal of Biological Macromolecules 10+4 123smiles 2024-12-22 5/250 2024-12-23 20:09 by TopEdit
[基金申请] 大论文改改变成项目申请书 +6 wusiqi2020 2024-12-21 6/300 2024-12-23 17:28 by 星雨寒Mos
[硕博家园] 有未就业的博士吗？ +11 大发财树 2024-12-22 12/600 2024-12-23 17:21 by Zoeyhsyk
[论文投稿] MDPI投稿连续拒稿是什么原因？文章质量不好吗？还是其他原因？ 2+9 多听多看多学 2024-12-17 19/950 2024-12-23 17:12 by maolC
[教师之家] 如果评职称不需要国家自然基金，还会有人去申请吗？ +3 akslis2024 2024-12-19 3/150 2024-12-23 16:00 by syl200707
[职场人生] 网络游戏有意义吗 +4 神明.斯派克. 2024-12-16 4/200 2024-12-23 15:15 by 开心就好56
[考博] 读博的欲望达到了巅峰 +17 小丸九 2024-12-17 17/850 2024-12-23 11:35 by s150535912
[教师之家] 为啥很多高校老师不愿意当副院长？ +12 意得辑_editage 2024-12-18 16/800 2024-12-23 11:29 by jurkat.1640
[教师之家] 在学校是提拔成处长难度大还是教授难度大 +10 akslis2024 2024-12-17 13/650 2024-12-23 11:05 by 会飞的猪157
[基金申请] 网传董晨院士涉嫌24篇论文造假，本人回应：非恶意造假 +7 babu2015 2024-12-17 7/350 2024-12-23 10:25 by 老钱秀
[硕博家园] 柔性引进硕博人才 +7 大发财树 2024-12-20 7/350 2024-12-23 02:32 by upceric
[教师之家] 今年的科研绩效只奖励Q1了 +12 holypower 2024-12-20 17/850 2024-12-21 16:13 by willbuilder
[教师之家] 学校排名靠前发展好，最大的受益者是校领导还是普通老师？ +6 akslis2024 2024-12-17 7/350 2024-12-21 11:22 by 凌晨一点393
[论文投稿] Transportation Research Part C 投稿模板 5+3 Yetzirah 2024-12-20 4/200 2024-12-20 16:32 by 北京莱茵润色
[教师之家] 删了哦 (EPI+-1)(金币-50) +5 原因在哪里 2024-12-18 6/300 2024-12-19 12:25 by keikofans
[论文投稿] 论文投稿 +4 @星尘@ 2024-12-17 6/300 2024-12-19 09:39 by YXLSYJK
[论文投稿] 毕业论文疑虑 20+6 风吹荷叶煞 2024-12-17 17/850 2024-12-18 17:35 by holypower
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭