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[交流]
【求助/交流】请教：引物设计的酶切位点等是否计算入Tm中?
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| 请教高手，设计引物时5‘端加的酶切位点等是否在计算Tm时需要计入？上下游引物碱基个数不能相差太多，但是加入5’端的连接子酶切位点等在计算上下游碱基个数差别时是否计入？ |
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三磷酸腺苷
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3楼2010-10-22 10:07:33
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silicare(金币+2):意义重大 2011-01-07 08:26:53
silicare(金币+2):意义重大 2011-01-07 08:26:53
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向您请教个问题 想向您请教个问题，就是在这里http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2516058 您的回答是： 我习惯分两步 前面是只考虑互补的，大概跑8~10个循环，后面的就考虑酶切位点，提高退火温度 想请问一下：您是否是普通的PCR 94℃预变性后，8~10个循环（前面是只考虑互补的），后面的就考虑酶切位点，提高退火温度（12-15个循环）；然后是72℃ 延伸。共四个循环骤？ ----------------------------- 版主说了，不私下解决问题 ==+ 我说的每个完整的循环都包含延伸步骤啊……请好好回顾PCR的原理 |
11楼2011-01-06 23:59:52
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