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zheng20089829

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】从大肠杆菌中提不出质粒,请教各位 已有4人参与

我将质粒转入DH5a,氨苄抗性,用甘油菌划线长的也很好,摇试管却长的很慢,质粒小提没有提出质粒,请教大家有没遇到类似情况
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taigongzaici

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):有道理。 2010-10-19 13:56:30
摇试管却长的很慢,按理说,活化后在摇菌,高兴很高的,不应该啊
1,明确是啥载体,抗生素没问题吧
2,提质粒的盒子没问题吧
3,你的操作
2楼2010-10-19 10:22:30
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zheng20089829

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by taigongzaici at 2010-10-19 10:22:30:
摇试管却长的很慢,按理说,活化后在摇菌,高兴很高的,不应该啊
1,明确是啥载体,抗生素没问题吧
2,提质粒的盒子没问题吧
3,你的操作

载体就是PGEMT载体,我同时也做两外一个,情况很好,这个我做了两次都是如此,不知道是什么原因
3楼2010-10-19 10:35:50
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丰之第

铜虫 (正式写手)

我也遇到过
4楼2010-10-19 12:01:20
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feiye2214

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-19 13:56:41
问题出在转化吧?我之前做的转化,没转进去,但是上面长菌落,是变异菌,比转化子出现的晚近12小时,它也有抗性,不过肯定提不出质粒了啊
试试再转化质粒吧
你说是甘油划菌,可能是你保留的菌种时间很长了,质粒丢失也是有可能的
重复、重复、再重复——你成功了,生物分子实验都这样
人品值也很重要
5楼2010-10-19 13:26:42
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zheng20089829

木虫 (小有名气)

有理,谢谢各位指点!!
6楼2010-10-19 14:34:14
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