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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】从大肠杆菌中提不出质粒，请教各位
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zheng20089829

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】从大肠杆菌中提不出质粒，请教各位已有4人参与

我将质粒转入DH5a，氨苄抗性，用甘油菌划线长的也很好，摇试管却长的很慢，质粒小提没有提出质粒，请教大家有没遇到类似情况
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1楼2010-10-19 10:14:04
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taigongzaici

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):有道理。 2010-10-19 13:56:30
摇试管却长的很慢,按理说，活化后在摇菌，高兴很高的，不应该啊
1，明确是啥载体，抗生素没问题吧
2，提质粒的盒子没问题吧
3，你的操作
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-10-19 10:22:30
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zheng20089829

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by taigongzaici at 2010-10-19 10:22:30:
摇试管却长的很慢,按理说，活化后在摇菌，高兴很高的，不应该啊
1，明确是啥载体，抗生素没问题吧
2，提质粒的盒子没问题吧
3，你的操作

载体就是PGEMT载体，我同时也做两外一个，情况很好，这个我做了两次都是如此，不知道是什么原因
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3楼2010-10-19 10:35:50
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丰之第

铜虫 (正式写手)
我也遇到过
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4楼2010-10-19 12:01:20
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feiye2214

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-19 13:56:41
问题出在转化吧？我之前做的转化，没转进去，但是上面长菌落，是变异菌，比转化子出现的晚近12小时，它也有抗性，不过肯定提不出质粒了啊
试试再转化质粒吧
你说是甘油划菌，可能是你保留的菌种时间很长了，质粒丢失也是有可能的
重复、重复、再重复——你成功了，生物分子实验都这样
人品值也很重要
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-10-19 13:26:42
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zheng20089829

木虫 (小有名气)
有理，谢谢各位指点！！
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6楼2010-10-19 14:34:14
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