应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】热不对称PCR的问题，回帖就送金币！！多谢帮忙回答的，帮顶的！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
501/5返回列表12345下一页
查看: 4607  |  回复: 49
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】热不对称PCR的问题，回帖就送金币！！多谢帮忙回答的，帮顶的！！ 已有12人参与

首先，热不对称PCR的好处是什么？它主要用来扩已知序列的旁侧基因，然后通过
一步步提高退火温度，最后达到P出一条带的目的。这样理解对吗？

其次，我现在做启动子的染色体步移，加了接头后。试剂盒也是推荐用热不对称PCR。但这时我知道我的接头序列，又知道我的已知序列，完全可以用普通PCR扩嘛。这样想对吗？

还有，不太理解接头引物AP和特异性引物GSP之间在片段长度和退火上的差异。试剂盒上的：AP1:22个碱基 51度退火 AP2:19， 57度 。而建议我的GSP：25~28个碱基， 退火和GC和AP差不多。为什么碱基数差那么多？

最后，2步法PCR（94度,64度）和3步法（94，退火，72度）有什么区别？好处是？

大家一起来讨论下这四个问题吧！！多谢了~~~谢谢！！！！
回帖就有金币，每人可领5次！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-17 16:53:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

带刀猎人

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-10-18 11:46:52
楼上的太不厚道了，我说一下我的想法，呵呵
第一，你所说的热不对称PCR实际上是TOUCHDOWN  PCR的逆过程，这是在模板量较少或这是引物与模板亲和力较弱时使用的，目的是前面低温退火经过低特异性的扩增获得大量的模板，在提高退火温度，进行特异性高的扩增，或得目的产物。
第二，普通PCR由于没有中间的基因特异性引物，这样就导致上下游引物之间的距离很长，也就是PCR的产物片段太长，从而使PCR得保真度降低，效率降低。所以在普通PCR的上下游引物之间加上GSP缩短的产物长度。
第三，解释不清楚，可以查一下Tm值除了GC含量外，还有其他的影响因素没。
第四，两步法PCR节约了时间，同时提高了退火温度，增加了特异性。
以上仅为个人己见，有不妥之处，望各为虫友指正，见谅。谢谢！
赞一下(3人) 回复此楼
38楼2010-10-18 11:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

taigongzaici

新虫 (小有名气)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
学习，期待大侠出现，顺便领金币，呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-10-17 18:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyanchunk

禁言 (初入文坛)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
3楼2010-10-17 19:08:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyanchunk

禁言 (初入文坛)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
4楼2010-10-17 19:09:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyanchunk

禁言 (初入文坛)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
5楼2010-10-17 19:09:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyanchunk

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2010-10-17 19:09:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilei8610

铁杆木虫 (职业作家)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
帮你顶一下，专业不一样，没法帮你，呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
以马内利！
7楼2010-10-17 19:47:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
帮顶，期待答案~~
回复此楼
8楼2010-10-17 21:30:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天龙n部

金虫 (小有名气)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
额，热不对称PCR我师姐做过，这个期待答案
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-10-17 21:33:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flytsing1003

金虫 (著名写手)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
帮顶~~~~
回复此楼
10楼2010-10-17 21:35:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 adslye 的主题更新
501/5返回列表12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 347求调剂 +3 山顶见α 2026-03-25 3/150 2026-03-28 14:13 by 唐沐儿
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-03-28 3/150 2026-03-28 12:04 by 王保杰33
[考研] 材料与化工考研调剂 +17 孅華 2026-03-22 17/850 2026-03-28 08:35 by WYUMater
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +9 vv迷 2026-03-22 9/450 2026-03-27 15:59 by 不吃魚的貓
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 求调剂323材料与化工 +7 1124361 2026-03-24 7/350 2026-03-27 10:22 by wangjy2002
[考研] 343求调剂 +4 赠我一本书 2026-03-23 4/200 2026-03-27 00:40 by wxiongid
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭