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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】热不对称PCR的问题，回帖就送金币！！多谢帮忙回答的，帮顶的！！
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spc08

荣誉版主 (文学泰斗)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
帮顶
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31楼2010-10-18 09:30:11
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢提供，博客不错~呵呵 2010-10-18 10:29:14
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4c20a964010092ll.html
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32楼2010-10-18 10:27:45
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences. Yao-Guang Liu and Yuanling Chen. BioTechniques Vol. 43, No. 5: pp 649-656 (Nov 2007)
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33楼2010-10-18 10:29:47
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)
我具体操作是按上面的英文文献来的，注意设计的第二条引物与博客上的有所区别。我是一次成功的。
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34楼2010-10-18 10:32:24
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adslye

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yuanbo934 at 2010-10-18 10:32:24:
我具体操作是按上面的英文文献来的，注意设计的第二条引物与博客上的有所区别。我是一次成功的。

恩，我去看看！！谢谢！
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35楼2010-10-18 10:34:39
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kissing

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
厉害啊 真厉害
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36楼2010-10-18 10:36:19
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
TAIL-PCR啊，我现在的实验室最成熟的技术，没有之一

[ Last edited by zgb1982 on 2010-10-18 at 11:18 ]
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37楼2010-10-18 11:14:29
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带刀猎人

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-10-18 11:46:52
楼上的太不厚道了，我说一下我的想法，呵呵
第一，你所说的热不对称PCR实际上是TOUCHDOWN  PCR的逆过程，这是在模板量较少或这是引物与模板亲和力较弱时使用的，目的是前面低温退火经过低特异性的扩增获得大量的模板，在提高退火温度，进行特异性高的扩增，或得目的产物。
第二，普通PCR由于没有中间的基因特异性引物，这样就导致上下游引物之间的距离很长，也就是PCR的产物片段太长，从而使PCR得保真度降低，效率降低。所以在普通PCR的上下游引物之间加上GSP缩短的产物长度。
第三，解释不清楚，可以查一下Tm值除了GC含量外，还有其他的影响因素没。
第四，两步法PCR节约了时间，同时提高了退火温度，增加了特异性。
以上仅为个人己见，有不妥之处，望各为虫友指正，见谅。谢谢！
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38楼2010-10-18 11:28:09
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带刀猎人

新虫 (小有名气)
抱歉，我只看了第一页的帖子，以为后面没有跟帖，上贴中的“楼上的”仅指第一页的虫友，呵呵
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39楼2010-10-18 11:29:54
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marmot218

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
只做过普通PCR 顶一下！
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40楼2010-10-18 11:44:24
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