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spc08

荣誉版主 (文学泰斗)


adslye(金币+1):谢谢参与
帮顶
31楼2010-10-18 09:30:11
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢提供,博客不错~呵呵 2010-10-18 10:29:14
32楼2010-10-18 10:27:45
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences. Yao-Guang Liu and Yuanling Chen. BioTechniques Vol. 43, No. 5: pp 649-656 (Nov 2007)
33楼2010-10-18 10:29:47
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

我具体操作是按上面的英文文献来的,注意设计的第二条引物与博客上的有所区别。我是一次成功的。
34楼2010-10-18 10:32:24
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adslye

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yuanbo934 at 2010-10-18 10:32:24:
我具体操作是按上面的英文文献来的,注意设计的第二条引物与博客上的有所区别。我是一次成功的。

恩,我去看看!!谢谢!
35楼2010-10-18 10:34:39
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kissing

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
厉害啊 真厉害
36楼2010-10-18 10:36:19
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zgb1982

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
TAIL-PCR啊,我现在的实验室最成熟的技术,没有之一

[ Last edited by zgb1982 on 2010-10-18 at 11:18 ]
37楼2010-10-18 11:14:29
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带刀猎人

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-10-18 11:46:52
楼上的太不厚道了,我说一下我的想法,呵呵
第一,你所说的热不对称PCR实际上是TOUCHDOWN  PCR的逆过程,这是在模板量较少或这是引物与模板亲和力较弱时使用的,目的是前面低温退火经过低特异性的扩增获得大量的模板,在提高退火温度,进行特异性高的扩增,或得目的产物。
第二,普通PCR由于没有中间的基因特异性引物,这样就导致上下游引物之间的距离很长,也就是PCR的产物片段太长,从而使PCR得保真度降低,效率降低。所以在普通PCR的上下游引物之间加上GSP缩短的产物长度。
第三,解释不清楚,可以查一下Tm值除了GC含量外,还有其他的影响因素没。
第四,两步法PCR节约了时间,同时提高了退火温度,增加了特异性。
以上仅为个人己见,有不妥之处,望各为虫友指正,见谅。谢谢!
38楼2010-10-18 11:28:09
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带刀猎人

新虫 (小有名气)

抱歉,我只看了第一页的帖子,以为后面没有跟帖,上贴中的“楼上的”仅指第一页的虫友,呵呵
39楼2010-10-18 11:29:54
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marmot218

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
只做过普通PCR 顶一下!
40楼2010-10-18 11:44:24
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