| 查看: 4597 | 回复: 49 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】热不对称PCR的问题，回帖就送金币！！多谢帮忙回答的，帮顶的！！ 已有12人参与
|
|||
|
首先，热不对称PCR的好处是什么？它主要用来扩已知序列的旁侧基因，然后通过 一步步提高退火温度，最后达到P出一条带的目的。这样理解对吗？ 其次，我现在做启动子的染色体步移，加了接头后。试剂盒也是推荐用热不对称PCR。但这时我知道我的接头序列，又知道我的已知序列，完全可以用普通PCR扩嘛。这样想对吗？ 还有，不太理解接头引物AP和特异性引物GSP之间在片段长度和退火上的差异。试剂盒上的：AP1:22个碱基 51度退火 AP2:19， 57度 。而建议我的GSP：25~28个碱基， 退火和GC和AP差不多。为什么碱基数差那么多？ 最后，2步法PCR（94度,64度）和3步法（94，退火，72度）有什么区别？好处是？ 大家一起来讨论下这四个问题吧！！多谢了~~~谢谢！！！！ 回帖就有金币，每人可领5次！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有88人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于一个高级酸和高级醇的酯化反应，各种求助，有金币伺候！
已经有17人回复
- tail-PCR问题，求指导
已经有9人回复
- 帮忙看一下这种分离程度能用来定量分析吗
已经有13人回复
- 没金币求助，菌体在液体培养基中聚集成团絮状
已经有21人回复
- PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？
已经有4人回复
- pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!
已经有21人回复
- 大家给我说说成都有机所的不对称合成在国内排名第几吖
已经有9人回复
- 求助：使用B-methyl CBS 不对称还原酮为醇，CBS使用溶液的还是固体的好？
已经有4人回复
- 求助：约6kb质粒做模板的pcr程序怎么设定啊
已经有12人回复
- 相同条件的pcr产物，跑出不同的条带，是什么原因[/img][/img][/img]
已经有12人回复
- 怎么对回帖的人手动发金币？？？多谢
已经有11人回复
- 关于Molecular breeding的投稿问题(回帖就送金币)
已经有33人回复
- 回帖就送金币。求高人指教。报到证与户口迁移证过期问题。
已经有43人回复
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-10-18 11:46:52
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-10-18 11:46:52
|
楼上的太不厚道了，我说一下我的想法，呵呵 第一，你所说的热不对称PCR实际上是TOUCHDOWN PCR的逆过程，这是在模板量较少或这是引物与模板亲和力较弱时使用的，目的是前面低温退火经过低特异性的扩增获得大量的模板，在提高退火温度，进行特异性高的扩增，或得目的产物。 第二，普通PCR由于没有中间的基因特异性引物，这样就导致上下游引物之间的距离很长，也就是PCR的产物片段太长，从而使PCR得保真度降低，效率降低。所以在普通PCR的上下游引物之间加上GSP缩短的产物长度。 第三，解释不清楚，可以查一下Tm值除了GC含量外，还有其他的影响因素没。 第四，两步法PCR节约了时间，同时提高了退火温度，增加了特异性。 以上仅为个人己见，有不妥之处，望各为虫友指正，见谅。谢谢！ |
38楼2010-10-18 11:28:09
39楼2010-10-18 11:29:54
