应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】热不对称PCR的问题，回帖就送金币！！多谢帮忙回答的，帮顶的！！
501/5返回列表12345下一页
查看: 4582  |  回复: 49
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】热不对称PCR的问题，回帖就送金币！！多谢帮忙回答的，帮顶的！！ 已有12人参与

首先，热不对称PCR的好处是什么？它主要用来扩已知序列的旁侧基因，然后通过
一步步提高退火温度，最后达到P出一条带的目的。这样理解对吗？

其次，我现在做启动子的染色体步移，加了接头后。试剂盒也是推荐用热不对称PCR。但这时我知道我的接头序列，又知道我的已知序列，完全可以用普通PCR扩嘛。这样想对吗？

还有，不太理解接头引物AP和特异性引物GSP之间在片段长度和退火上的差异。试剂盒上的：AP1:22个碱基 51度退火 AP2:19， 57度 。而建议我的GSP：25~28个碱基， 退火和GC和AP差不多。为什么碱基数差那么多？

最后，2步法PCR（94度,64度）和3步法（94，退火，72度）有什么区别？好处是？

大家一起来讨论下这四个问题吧！！多谢了~~~谢谢！！！！
回帖就有金币，每人可领5次！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-17 16:53:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

带刀猎人

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-10-18 11:46:52
楼上的太不厚道了，我说一下我的想法，呵呵
第一，你所说的热不对称PCR实际上是TOUCHDOWN  PCR的逆过程，这是在模板量较少或这是引物与模板亲和力较弱时使用的，目的是前面低温退火经过低特异性的扩增获得大量的模板，在提高退火温度，进行特异性高的扩增，或得目的产物。
第二，普通PCR由于没有中间的基因特异性引物，这样就导致上下游引物之间的距离很长，也就是PCR的产物片段太长，从而使PCR得保真度降低，效率降低。所以在普通PCR的上下游引物之间加上GSP缩短的产物长度。
第三，解释不清楚，可以查一下Tm值除了GC含量外，还有其他的影响因素没。
第四，两步法PCR节约了时间，同时提高了退火温度，增加了特异性。
以上仅为个人己见，有不妥之处，望各为虫友指正，见谅。谢谢！
赞一下(3人) 回复此楼
38楼2010-10-18 11:28:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

taigongzaici

新虫 (小有名气)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
学习，期待大侠出现，顺便领金币，呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-10-17 18:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyanchunk

禁言 (初入文坛)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
3楼2010-10-17 19:08:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyanchunk

禁言 (初入文坛)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
4楼2010-10-17 19:09:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyanchunk

禁言 (初入文坛)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
本帖内容被屏蔽
5楼2010-10-17 19:09:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyanchunk

禁言 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2010-10-17 19:09:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lilei8610

铁杆木虫 (职业作家)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
帮你顶一下，专业不一样，没法帮你，呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
以马内利！
7楼2010-10-17 19:47:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
帮顶，期待答案~~
回复此楼
8楼2010-10-17 21:30:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天龙n部

金虫 (小有名气)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
额，热不对称PCR我师姐做过，这个期待答案
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-10-17 21:33:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flytsing1003

金虫 (著名写手)
★
adslye(金币+1):谢谢参与
帮顶~~~~
回复此楼
10楼2010-10-17 21:35:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 adslye 的主题更新
501/5返回列表12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +7 自由煎饼果子 2026-03-16 7/350 2026-03-22 22:40 by ACS Nano——
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 17/850 2026-03-22 15:18 by 脱颖而出
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 4/200 2026-03-22 11:04 by 搏击518
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-18 3/150 2026-03-21 17:31 by ColorlessPI
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +5 纸鱼ly 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:11 by 学员8dgXkO
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭