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adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】热不对称PCR的问题,回帖就送金币!!多谢帮忙回答的,帮顶的!! 已有12人参与

首先,热不对称PCR的好处是什么?它主要用来扩已知序列的旁侧基因,然后通过
一步步提高退火温度,最后达到P出一条带的目的。这样理解对吗?

其次,我现在做启动子的染色体步移,加了接头后。试剂盒也是推荐用热不对称PCR。但这时我知道我的接头序列,又知道我的已知序列,完全可以用普通PCR扩嘛。这样想对吗?

还有,不太理解接头引物AP和特异性引物GSP之间在片段长度和退火上的差异。试剂盒上的:AP1:22个碱基 51度退火 AP2:19, 57度 。而建议我的GSP:25~28个碱基, 退火和GC和AP差不多。为什么碱基数差那么多?

最后,2步法PCR(94度,64度)和3步法(94,退火,72度)有什么区别?好处是?

大家一起来讨论下这四个问题吧!!多谢了~~~谢谢!!!!
回帖就有金币,每人可领5次!!
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

我具体操作是按上面的英文文献来的,注意设计的第二条引物与博客上的有所区别。我是一次成功的。
34楼2010-10-18 10:32:24
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taigongzaici

新虫 (小有名气)


adslye(金币+1):谢谢参与
学习,期待大侠出现,顺便领金币,呵呵
2楼2010-10-17 18:56:14
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lilei8610

铁杆木虫 (职业作家)


adslye(金币+1):谢谢参与
帮你顶一下,专业不一样,没法帮你,呵呵
以马内利!
7楼2010-10-17 19:47:22
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lhwei1987

铁杆木虫 (正式写手)


adslye(金币+1):谢谢参与
帮顶,期待答案~~
8楼2010-10-17 21:30:12
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