| 查看: 5659 | 回复: 6 | |||
Ella14银虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】大家酶切载体怎么切？一般切多久？ 已有4人参与
|
| 大家酶切载体怎么切？一般切多久？最近挑克隆总是不见阳性的。做了载体对照，张得很好，1UG，1U的酶，切过夜。。。去磷。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有53人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 表达载体双酶切
已经有9人回复
- 求真菌表达载体pBARGPE1的酶切方法！！！
已经有11人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 【原创经验篇】由一个简单的酶切重组载体想到的..........
已经有31人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 载体酶切
已经有13人回复
- 在基因重组过程中，怎样鉴别质粒载体是否被限制性内切酶切好？
已经有10人回复
- 【求助/交流】大家酶切载体的时候回收完了用不用碱性磷酸酶处理啊？
已经有6人回复
- 【求助/交流】片段转进去，提质粒酶切发现载体小了，想不明白
已经有19人回复
- 【分享】关于载体双酶切的一些经验
已经有19人回复
- 【求助/交流】载体酶切和连接
已经有12人回复
- 【求助/交流】单酶切载体竟然没切开，寻求原因？？
已经有15人回复
zjzz
木虫 (正式写手)
在通往变态的坦途上
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2109.3
- 帖子: 793
- 在线: 22.2小时
- 虫号: 326115
- 注册: 2007-03-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物/分子生物学
2楼2010-10-12 03:21:22
王会征
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 9656.2
- 散金: 6
- 红花: 8
- 帖子: 1066
- 在线: 244.3小时
- 虫号: 470121
- 注册: 2007-11-29
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2010-10-12 08:22:29
王会征
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 9656.2
- 散金: 6
- 红花: 8
- 帖子: 1066
- 在线: 244.3小时
- 虫号: 470121
- 注册: 2007-11-29
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2010-10-12 08:39:01
ben1147
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 18 (小学生)
- 贵宾: 0.003
- 金币: 5847.6
- 红花: 6
- 帖子: 952
- 在线: 116.9小时
- 虫号: 709538
- 注册: 2009-02-26
- 专业: 微生物生理与生物化学
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-13 08:39:19
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-13 08:39:19
|
挑克隆没有阳性的话，要分你酶切之后是否切胶回收了 如果切胶回收了，那假阳性应该是载体自连引起的，可能是去磷酸化不完全 如果没有切胶回收，直接拿酶切体系纯化后做连接，那么没切开和自连都有可能导致假阳性。区分方法就是用酶切产物直接做转化，如果也长，就说明有剩余没切开的质粒，要延长酶切时间（如果已经切过夜，应该不是时间问题）、加大酶量，或者检查一下酶切体系离子浓度或者酶切温度是否有问题；如果不长，那就还是自连引起的 至于载体和片段比例，对于去磷酸化或者双酶切的载体来说，没必要十分严格。至少我基本上就不会去关心浓度比，只要载体和片段质量过关，并且有一定的量，理论上不会出问题 |
5楼2010-10-12 12:39:36
Ella14
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 142.9
- 散金: 9
- 帖子: 227
- 在线: 17.4小时
- 虫号: 442710
- 注册: 2007-10-27
- 性别: MM
- 专业: 细胞衰老
6楼2010-10-12 12:59:53
zjzz
木虫 (正式写手)
在通往变态的坦途上
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2109.3
- 帖子: 793
- 在线: 22.2小时
- 虫号: 326115
- 注册: 2007-03-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物/分子生物学
7楼2010-10-13 02:00:10
28