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三妹妹

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】镍柱纯化的蛋白保存在-20度一个星期,拿出来都是沉淀?? 已有12人参与

当初纯化完后还很清亮的,未加甘油,放在-20度,放假回来管里都是白色沉淀(蛋白吧),不知道原因?用尿素1:1可以溶解。
尿素溶解后蛋白的活性会受到影响吗?
期待达人帮忙解答一下吧,万分感谢!
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-11 17:02:30
其实甘油是可以不加的,试试下述条件:

分装小份,30ul于PCR薄壁管中;

液氮速冻,保存于-80;

取出来后,握于手中解冻。

呵呵,一篇文献上这样写的,说可以有效防止蛋白沉淀。挺好用的。

祝好运
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2010-10-11 13:25:19
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):鼓励热心虫友交流。 2010-10-11 12:11:34
那要看你加的尿素浓度啊,8M的肯定没活性了,低浓度的一般没影响(1-2M),我就常用1M的尿素溶解蛋白,活性没有影响啊。你说的1:1没有提到浓度多大啊,所以很难说。
2楼2010-10-11 11:55:32
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)

三妹妹(金币+2):谢谢那!! 2010-10-11 13:15:12
至于蛋白沉淀,时间长了别说是-20,就算-80也会沉淀变性啊,再说你也没加保护剂啊。
3楼2010-10-11 11:57:07
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三妹妹

金虫 (小有名气)

呀呀,不好,我加了8M的尿素,
还好没有全加,剩下的用1M的试试。
沉淀物就是变性了的蛋白吗?
那保护剂一般加什么,除了甘油还有别的吗?
4楼2010-10-11 13:13:35
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