24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yuanalice

银虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 682.8
散金: 20
红花: 1
帖子: 244
在线: 143.4小时
虫号: 930948
注册: 2009-12-20
专业: 认知科学

[交流] 【求助/交流】目的基因连接表达载体后涂板不长菌已有3人参与

将目的基因和表达载体用两个限制性酶切后16度过夜连接，后转化DH5α37度过夜培养竟然一个菌也没有长，理论上说即使没有连接成功也应该有空载体转化成功呀，怎么能一个菌也不长呢？求高手指点

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有229人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

那些大肠杆菌感受态是Dam+型，基因可被DpnI降解已经有6人回复
两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗? 已经有7人回复
构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上已经有54人回复
做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why??? 已经有24人回复
目的片段与表达载体的连接已经有23人回复
目的片段和T1载体连接后转入感受态细胞涂板子总不长菌…… 已经有7人回复
目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题已经有14人回复
根据已知序列，从相同菌种(菌株编号不同)中能PCR出目的基因吗？已经有6人回复
已知全长基因怎样克隆并构建表达载体已经有8人回复
为什么我做的酶切连接总是不长斑呢？已经有24人回复
克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？已经有17人回复
【求助/交流】目的基因与pPIC9K连接的问题！已经有9人回复
【求助/交流】质粒跟目的基因连接不上怎么办已经有17人回复
【求助/交流】转有空质粒的菌跟转有目的基因的重组质粒的菌哪个生长快？已经有3人回复
【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？已经有20人回复
【求助/交流】大肠杆菌表达的目的蛋白没活性，可以考虑换什么表达载体？已经有7人回复

1楼2010-10-09 11:01:15

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

tianyinghu

金虫 (小有名气)

MolEPI: 1
应助: 23 (小学生)
金币: 527.5
红花: 1
帖子: 52
在线: 43.9小时
虫号: 502164
注册: 2008-02-14
专业: 生物大分子结构与功能

★ ★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+5):不错，欢迎常来~ 2010-10-09 14:18:56
yuanalice(金币+2): 2010-10-10 12:21:35

首先
1，确定你的载体抗性没有错，没有拿错载体，第二回收浓度是多少。
2.你的抗性板有没有弄错
3.上面2点建议做个质粒转化，就拿你做酶切的质粒。再加上你确实的同抗性的其他质粒，看长不长
如果长，那就说明板和载体应该是没问题，如果不长（一个长一个不长或是2个都不长），可能有4个原因，
第一载体错了第二板错了第三连接不没连接成功第四感受态有问题（2个质粒都不长）

排除以上几点后如果确定是连接没成功，很简单载体酶切后回收下来测个浓度，还有片度，按照适当的比例连接，建议别16度过夜，我一般是用22度2个小时就可以了，16度四小时，或是4度过夜，如果你时间来不急你可以22都连接一段时间然后放到四度，第2天转化，因为很多实验室质粒放过夜会见解的，可能是和用的水有关系。我见过最严重的是2小时质粒就见解的，所以建议你提质粒的时候要注意。