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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因鉴定问题
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小丁山

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】基因鉴定问题已有5人参与

如何根据相近种属的产糖基因序列来克隆或者推测一株新筛出菌产糖基因，从而鉴定产糖基因？此外PCR引物该如何设计呢？本人跨专业，对分子方面的东西不甚了解，望高人指点。
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1楼2010-09-26 13:48:08
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banhf

新虫 (初入文坛)
根据该基因的保守序列设计引物，从新菌株中进行PCR，得到PCR产物后可测序验证。
引物的设计有专门的设计软件。
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2楼2010-09-27 10:50:14
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yierangel

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意楼上的。
还可以通过Tn5转座插入的方法先将未知产糖基因沉默后，再根据转座子的序列设计引物，利用染色体步移法将该基因PCR扩增后进行测序。
该方法主要用于未知基因的发现，如果是已知基因的话就用楼上的方法即可。
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3楼2010-09-27 18:21:42
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
用DNAStar、Primer5.0设计引物，一定要找保守区设计，否则很难扩出来
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不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
4楼2010-09-27 19:19:31
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小丁山

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yierangel at 2010-09-27 18:21:42:
同意楼上的。
还通过Tn5转座插入的方法先将未知产糖基因沉默可以后，再根据转座子的序列设计引物，利用染色体步移法将该基因PCR扩增后进行测序。
该方法主要用于未知基因的发现，如果是已知基因的话就用楼上的方 ...

如何才能通过Tn5转座插入的方法将未知产糖基因沉默？那盲目性不是很高啊？
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5楼2010-10-12 15:37:24
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jiang0622

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by yierangel at 2010-09-27 18:21:42
同意楼上的。
还可以通过Tn5转座插入的方法先将未知产糖基因沉默后，再根据转座子的序列设计引物，利用染色体步移法将该基因PCR扩增后进行测序。
该方法主要用于未知基因的发现，如果是已知基因的话就用楼上的方法 ...

虫友 您做过Tn5突变吗？我一直在做 但是我做反向PCR做突变基因的鉴定 一直没有成功  您有好一点的鉴定的建议吗？
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6楼2013-12-25 10:57:49
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