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struggle

铁虫 (初入文坛)

[求助] 有关转基因植株的鉴定

各位同仁,我现在做的是小麦转基因的内容,在进行PCR验证的时候,目标带出现的很少,理论上应该是1比3的比例,有可能是什么原因造成的?DNA 的质量、反应体系、引物等?
另外,如果进行SOURTHERN 杂交,小麦籽粒大约需要多少量,因为我们是加代的材料,分蘖比较少,如果取穗子,那最后成熟籽粒就无法进行品质的检测,所以,请大家提出宝贵建议。谢谢了。
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


木虫/panda(金币+1): 代楼主给应助者评分 2011-08-22 20:14:59
你检测的转基因几代的单株呀,T0 OR  T1 ? 如果是T0代的话那就说明你的阳性率比较低。如果是T1代的话,如果单拷贝理论上是3:1的比例,如果出现这样的情况那就可能是某一个环节出现问题了
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
2楼2011-05-19 11:12:26
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bired

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

肯定不会是3:1的,不用担心。
3楼2011-05-19 16:22:19
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lxjwishes

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


木虫/panda(金币+1): 代楼主给应助者评分 2011-08-22 20:15:06
为什么要用种子做southern呢,如果看分离比例不能在抗性培养基上筛选吗
pleasemywings,flymeaway.
4楼2011-07-14 15:18:16
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yln157408

新虫 (初入文坛)

学习中。。。我也刚做转基因方面,不过是水稻的
活到老,学到老
5楼2011-07-15 22:40:52
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xn712100

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


木虫/panda(金币+1): 代楼主给应助者评分 2011-08-22 20:15:15
我之前做小麦转基因也碰到类似的现象。我们通常到T1代才进行SOUTHERN检测,主要是用叶片。T0代苗少,无法获得足够多的DNA进行OUTHERN,只做PCR和GUS染色初步检测。
6楼2011-07-18 11:19:46
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xn712100

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你可以尝试找一对基因组引物(扩增片段与你检测的片段大小基本一致)先检测一下模板的质量。
7楼2011-07-18 11:24:08
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