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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 有关转基因植株的鉴定
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struggle

铁虫 (初入文坛)

[求助] 有关转基因植株的鉴定

各位同仁，我现在做的是小麦转基因的内容，在进行PCR验证的时候，目标带出现的很少，理论上应该是1比3的比例，有可能是什么原因造成的？DNA 的质量、反应体系、引物等？
另外，如果进行SOURTHERN 杂交，小麦籽粒大约需要多少量，因为我们是加代的材料，分蘖比较少，如果取穗子，那最后成熟籽粒就无法进行品质的检测，所以，请大家提出宝贵建议。谢谢了。
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1楼 2011-05-18 16:01:00
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xn712100

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
木虫/panda(金币+1): 代楼主给应助者评分 2011-08-22 20:15:15
我之前做小麦转基因也碰到类似的现象。我们通常到T1代才进行SOUTHERN检测，主要是用叶片。T0代苗少，无法获得足够多的DNA进行OUTHERN，只做PCR和GUS染色初步检测。
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6楼2011-07-18 11:19:46
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
木虫/panda(金币+1): 代楼主给应助者评分 2011-08-22 20:14:59
你检测的转基因几代的单株呀，T0 OR  T1 ？ 如果是T0代的话那就说明你的阳性率比较低。如果是T1代的话，如果单拷贝理论上是3:1的比例，如果出现这样的情况那就可能是某一个环节出现问题了
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
2楼2011-05-19 11:12:26
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bired

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

肯定不会是3：1的，不用担心。
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3楼2011-05-19 16:22:19
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lxjwishes

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
木虫/panda(金币+1): 代楼主给应助者评分 2011-08-22 20:15:06
为什么要用种子做southern呢，如果看分离比例不能在抗性培养基上筛选吗
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pleasemywings,flymeaway.
4楼2011-07-14 15:18:16
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