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liubin

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[交流] 【交流】SDS-PAGE

本人以前未做过SDS-PAGE ，操作中遇到很多问题，至今未解决。
我将实验中遇到的问题，按时间顺序汇报如下，请大家不吝赐教。情况如下：

我使用的是凯基生物的全套试剂盒，使用的电泳槽为：BIO-RAD MINI-PROTEAN...
1. 按说明书配制分离胶和浓缩胶，及其他试剂。
分离胶凝胶时间2h
电流：10MA/30MA. 电泳时间：10h
结果：样品几乎一直停留在点样点一下2cm处。
2。将4×Tris-HCl/SDS, pH8.8 及4×Tris-HCl/SDS, pH6.8 稀释4倍使用
分离胶凝胶时间2h，剩余胶不凝，胶版内胶似乎已经凝固，故继续后续过程。
电流：10MA/50MA. 电泳时间：4h
结果：样品几乎一直停留在点样点一下2cm处。

检查发现，上槽漏液，但液面停留在梳齿一下位置左右，原因：上槽短玻璃板处未卡紧。
处理好漏液后继续电泳，电流：10MA，30min，跑胶完成，染色后有条带
3。重复以上步骤，电流：10/15/30MA，9h，染色后有条带。

我认为，上述实验均失败，请大家帮忙找一下原因。具体请教一下问题：
1）是否要同时设定电流和电压？国外的资料是以功率w 来表示的。
2） 4×Tris-HCl/SDS, pH8.8 及4×Tris-HCl/SDS, pH6.8 是否要进行稀释？
3）我使用的电泳仪是否有问题？

等候赐教！
万分感谢！

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