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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
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jiangqingbin

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带

各位大虫，我用农杆菌提取的质粒DNA，然后对目的基因（450bp）进行PCR扩增，电泳后发现多条带，其中两条最为清晰，用的marker是100bp的，发现在1000bp附近也有一条很清晰地带，请问是什么原因？
我对引物重复核对了几次，并且找公司又重新合成，可还是出现这样的结果。
是不是在提DNA后RNA溶解不充分，扩增体系里DNA样本量太多跑出条带，
或者DNA模板量太少出现引物二聚体等等....
还请各位大牛帮忙指导！！多谢
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1楼 2010-09-15 12:01:13
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zdmei

金虫 (小有名气)
★
jiangqingbin(金币+2): 2010-09-15 14:41:56
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-15 23:30:07
可能是引物在该质粒上有错配吧，可以适当提高退火温度。其实有你的目的条带就行，建议再对质粒做个酶切鉴定，还可以送测序但可能不太好测出来。
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3楼2010-09-15 12:32:49
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zdmei

金虫 (小有名气)
jiangqingbin(金币+1): 2010-09-18 10:16:31
看起来像是污染，有做过水对照吗？
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8楼2010-09-16 14:14:31
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