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yangwuyi2003

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为什么我反转录PCR的抗体的轻链基因测序后发现总是有终止子？ 已有6人参与

想请教各位虫友，我的杂交瘤细胞提取总RNA后反转录PCR再用引物扩增出来的轻链基因经测序后发现总是有终止子？
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1楼 2010-09-14 23:51:30
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by yangwuyi2003 at 2010-09-14 23:51:30:
想请教各位虫友，我的杂交瘤细胞提取总RNA后反转录PCR再用引物扩增出来的轻链基因经测序后发现总是有终止子？

终止子在两个引物内部吗？我扩增出的序列六个阅读框中有一个是没有终止密码子的。有时候可能是测序的问题。 长交流
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
2楼2010-09-15 09:11:05
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
“总RNA”？我觉得应该提mRNA吧！
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3楼2010-09-15 12:00:00
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lliu

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-15 23:26:50
引用回帖:
Originally posted by yangwuyi2003 at 2010-09-14 23:51:30:
想请教各位虫友，我的杂交瘤细胞提取总RNA后反转录PCR再用引物扩增出来的轻链基因经测序后发现总是有终止子？

你扩增的是杂交瘤细胞中SP2 融合细胞本身的Aberrant light chain，而不是被融合的B-细胞的light chain。如果我没有记错，这个终止密码应该在VK4的JK区附近。所以，你还要继续努力哟。

杂交瘤的Aberrant light chain 是影响抗体测序的一个主要问题，你可以查查文献了解细节。如果你的引物设计的足够好，建议你多测几个克隆，这用你就有机会碰到你所需的light chain。祝你好运。
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4楼2010-09-15 15:03:33
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教洋文

新虫 (初入文坛)
★
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请问虫友解决测序的问题了吗

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5楼2018-01-06 10:06:02
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924073140

新虫 (初入文坛)
★
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楼主，这个问题怎么解决的？
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6楼2018-12-19 17:08:48
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zw破风

金虫 (正式写手)
★
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TA克隆后的测序？

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7楼2018-12-19 21:48:54
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