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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】western 遇到问题已有1人参与

最近在做WESTERN blot，检测蛋白磷酸化。抗体是SIGMA买的Monoclonal Anti-Phosphoserine antibody，曾经做出来过，最近重复却做不出来啦！不是哪位高人做过相关实验，恳请赐教！不胜感激！

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一个人可以不成功，但不可以不成长！

1楼 2010-09-10 11:15:39

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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)

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Anson1358(金币+1): 2010-09-10 19:12:30

步步细心，应该没问题

倚楼听风雨，淡看江湖路！

3楼2010-09-10 18:35:23

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liyan66007

木虫 (正式写手)

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Anson1358(金币+1): 2010-09-10 19:12:38

可能是在洗的时候没洗好，或者是染色的时候出问题了

4楼2010-09-10 19:00:33

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sdqzsdqz

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Anson1358(金币+3):内参用什么？磷酸酶抑制剂怎么加！请赐教！能交流一下吗？我的QQ：284526282 2010-09-10 19:25:48

记得一起标一下内参，内参正常，那就是磷酸化抗体或者样品的问题，样品要加磷酸酶抑制剂的。

5楼2010-09-10 19:15:30

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sdqzsdqz

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★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):鼓励一下！ 2010-09-10 20:09:43

内参就是actin /tublin，如果能标出，说明你操作没问题的。很多磷酸化抗体标出的条带都很弱，你可以网上搜一下针对磷酸化抗体的WB实验流程，我觉得收样裂解蛋白的裂解液里一定要加一些磷酸酶，蛋白酶抑制剂

赞一下(2人)

6楼2010-09-10 19:30:20

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