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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】western 遇到问题 已有1人参与

最近在做WESTERN blot,检测蛋白磷酸化。抗体是SIGMA买的Monoclonal Anti-Phosphoserine antibody,曾经做出来过,最近重复却做不出来啦!不是哪位高人做过相关实验,恳请赐教!不胜感激!
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一个人可以不成功,但不可以不成长!
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sdqzsdqz

木虫 (著名写手)

Anson1358(金币+3):内参用什么?磷酸酶抑制剂怎么加!请赐教!能交流一下吗?我的QQ:284526282 2010-09-10 19:25:48
记得一起标一下内参,内参正常,那就是磷酸化抗体或者样品的问题,样品要加磷酸酶抑制剂的。
5楼2010-09-10 19:15:30
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)

Anson1358(金币+1): 2010-09-10 19:12:30
步步细心,应该没问题
倚楼听风雨,淡看江湖路!
3楼2010-09-10 18:35:23
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liyan66007

木虫 (正式写手)

Anson1358(金币+1): 2010-09-10 19:12:38
可能是在洗的时候没洗好,或者是染色的时候出问题了
4楼2010-09-10 19:00:33
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sdqzsdqz

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3):鼓励一下! 2010-09-10 20:09:43
内参就是actin /tublin,如果能标出,说明你操作没问题的。很多磷酸化抗体标出的条带都很弱,你可以网上搜一下针对磷酸化抗体的WB实验流程,我觉得收样裂解蛋白的裂解液里一定要加一些磷酸酶,蛋白酶抑制剂
6楼2010-09-10 19:30:20
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