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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接质粒的效率
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刘小乐

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接质粒的效率 已有2人参与

做完PCR之后，p完的基因片段需要与质粒连接。那那位牛人知道哪些质粒的连接效率最好的？那种在大肠杆菌中能表达的,且克隆效果要好的质粒

[ Last edited by 刘小乐 on 2010-9-6 at 21:43 ]
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互动互利互相学习
1楼 2010-09-06 10:09:23
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tomocsn

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
刘小乐(金币+1):谢谢回帖 2010-09-06 11:00:51
我们实验室用的pUcm-t     pUcm-B    pMd-18t
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生命不息奋斗不止
2楼2010-09-06 10:35:45
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刘小乐

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tomocsn at 2010-09-06 10:35:45:
我们实验室用的pUcm-t     pUcm-B    pMd-18t

连接效率怎么样的？比如说需要连接时间长短，条件什么的
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互动互利互相学习
3楼2010-09-06 10:54:52
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zheng20089829

木虫 (小有名气)
★
刘小乐(金币+1):谢谢参与
要看你表达蛋白的情况选质粒的，我们用Pet 系列的，蛋白小的话可能需要融合表达
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4楼2010-09-06 11:30:35
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hyw1989960

木虫 (正式写手)

快乐家族二十八
★
刘小乐(金币+1):谢谢参与
你要表达的话，需要先酶切，在连入表达载体中，一般连接酶的效率都挺高了，挑选质粒是为了好表达，双酶切方便，防止自连
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快乐家族
5楼2010-09-06 11:51:54
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
刘小乐(金币+1):谢谢参与
连接效率需要看你的酶切位点和片段长度已经连接酶的质量

表达常用的pet系列和pgex系列等等
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6楼2010-09-06 12:18:39
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫
★
刘小乐(金币+1):谢谢参与
要与表达载体连接的话，要先酶切，连接效率主要决定于你的酶切位点，一般来说粘末端比平末端好连接
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7楼2010-09-06 13:01:57
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burkut65
刘小乐(金币+1):谢谢参与
silicare(金币-1):原因就不用说了吧 2010-09-06 18:22:47
8楼2010-09-06 14:31:02
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cheo163

金虫 (小有名气)
★
刘小乐(金币+1):谢谢参与
用过的有pet，pGEX，T载体
T载体效率最低，平端
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9楼2010-09-06 15:20:42
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★
刘小乐(金币+1):谢谢参与
没有听说过有这样去衡量一个质粒的链接效率的，片段链接效率比较一般是基于你的反应物纯度，缓冲液的适合程度和酶的效率及酶切位点的设计。
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For my life！
10楼2010-09-06 16:00:26
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