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【求助/交流】引物设计加碱基修饰问题
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| 我在设计一对引物,在给定的序列两头分别设计上下游引物,以扩增全部序列。由于选择的范围小,只能通过改变引物长度来选择引物。而所有的引物都不是很符合要求。请问我可不可以在原来的基础上在5'端加两个碱基修饰,提高引物的退火温度和引发效率??这两个碱基是可以随便加的吗?随便加ATGC都可以,还是经过blast后找到这条序列的上游碱基,加的碱基与序列的上游碱基一致?很迷茫,望各位大侠指教!感激不尽! |
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