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zwx26_2006

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】酶切位点两端都加了保护碱基受影响吗已有5人参与

设计引物加酶切位点时，将酶切位点两端的保护碱基都加上了，这样连接时不受影响吧

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1楼 2010-09-02 22:00:53

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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上

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引用回帖:

Originally posted by zwx26_2006 at 2010-09-03 09:13:14:

因为老连不上，所以就瞎找原因了

1.把引物单或引物管拿出来，看看上面的序列跟你定的是否一致。实验室曾经有人收到差了一个碱基的，但是人家顶多帮你重新合成一份不会赔偿你损失的时间
2.pcr片段先连TA克隆载体再切比直接切pcr线性片段好
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6.感受态的效率也很重要