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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么用RT-PCR等实验方法获得的mRNA往往缺少完整的5’端？
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adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】为什么用RT-PCR等实验方法获得的mRNA往往缺少完整的5’端？

为什么用RT-PCR等实验方法获得的mRNA往往缺少完整的5’端？

谢谢~~
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1楼 2010-08-20 14:01:57
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
看天(金币+1):鼓励回答 2010-08-20 20:29:37
adslye(金币+5):多谢，大概明白了。 2010-08-21 13:28:05
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-08-20 14:01:57:
为什么用RT-PCR等实验方法获得的mRNA往往缺少完整的5’端？

谢谢~~

分情况，一般用RT-PCR都是用oligo dT作为引物，进行反转录，如果你的mRNA比较长，或者有比较复杂的结构，那很难合成到mRNA 5'短，中间可能就有酶脱落的问题。
当然，如果你基因比较短或者结构比较简单，酶-模板-引物复合物就可以顺利通过到达5‘端。
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3楼2010-08-20 15:58:47
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-20 20:29:45
凡是做pcr，片段的两端都容易缺失碱基，这是很正常的事情
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2010-08-20 15:11:10
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
看天(金币+1):鼓励回答 2010-08-20 20:30:02
问题也不大，看你下游做什么实验，要是基因克隆就多提几次就好了，要是所实时定量那就没有问题
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4楼2010-08-20 16:31:40
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