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adslye

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】为什么用RT-PCR等实验方法获得的mRNA往往缺少完整的5’端?

为什么用RT-PCR等实验方法获得的mRNA往往缺少完整的5’端?

谢谢~~
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sqhnsd

金虫 (正式写手)


看天(金币+1):鼓励回答 2010-08-20 20:29:37
adslye(金币+5):多谢,大概明白了。 2010-08-21 13:28:05
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2010-08-20 14:01:57:
为什么用RT-PCR等实验方法获得的mRNA往往缺少完整的5’端?

谢谢~~

分情况,一般用RT-PCR都是用oligo dT作为引物,进行反转录,如果你的mRNA比较长,或者有比较复杂的结构,那很难合成到mRNA 5'短,中间可能就有酶脱落的问题。
当然,如果你基因比较短或者结构比较简单,酶-模板-引物复合物就可以顺利通过到达5‘端。
3楼2010-08-20 15:58:47
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空谷幽风

金虫 (正式写手)


看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-20 20:29:45
凡是做pcr,片段的两端都容易缺失碱基,这是很正常的事情
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2010-08-20 15:11:10
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)


看天(金币+1):鼓励回答 2010-08-20 20:30:02
问题也不大,看你下游做什么实验,要是基因克隆就多提几次就好了,要是所实时定量那就没有问题
4楼2010-08-20 16:31:40
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