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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pGEX-4T-1质粒的抗性是什么？
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】pGEX-4T-1质粒的抗性是什么？ 已有1人参与

小弟搞到这个pGEX-4T-1质粒，对它还不是很了解，它有什么抗性？还是转化后用的蓝白筛选？
在BamH I/Not I酶切后，插入目的基因片段，是不是这个位置？
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1楼 2010-08-20 09:00:52
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adou2008

银虫 (初入文坛)
feiye2214(金币+1): 2010-08-22 09:10:33
我以前用的是氨苄抗生素，
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学习，学习，再学习
2楼2010-08-20 12:44:04
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一夜不留痕

银虫 (初入文坛)
feiye2214(金币+1): 2010-08-22 09:10:38
在含氨苄青霉素培养的，貌似用的限制性内切酶是BamHI/SalI，是用蓝白斑筛选的！
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最好不相见，如此便可不相恋
3楼2010-08-20 12:53:57
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zhandeguo1

银虫 (小有名气)

抗性

百度一下弄到质粒图谱就知道了。在多克隆位点选择酶切位点就对了。
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4楼2010-08-20 13:46:18
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feiye2214

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 一夜不留痕 at 2010-08-20 12:53:57:
在含氨苄青霉素培养的，貌似用的限制性内切酶是BamHI/SalI，是用蓝白斑筛选的！

这是图片，怎么插入片段，可以蓝白筛选？
有人说MCS不在lac Z段，就不能用蓝白筛选？
到底什么情况？
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5楼2010-08-20 13:53:47
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
feiye2214(金币+1): 2010-08-22 09:10:54
是氨苄抗性，只要你选用的酶切位点在载体中有就可以把片段和载体酶切后进行连接，从你的图谱中没看到lacz的基因，所以应该没有蓝白斑的筛选功能
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2010-08-20 15:18:47
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
feiye2214(金币+1): 2010-08-22 09:11:00
氨苄青霉素抗性
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7楼2010-08-20 16:34:28
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guangming111

银虫 (小有名气)
双抗的吧，好像是
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8楼2010-08-21 23:20:31
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★
feiye2214(金币+1): 2010-08-22 09:10:11
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~~ 2010-08-22 09:21:57
GST标签后的多克隆位点可以用来插入片段，注意检查插入片段不要发生移码
这个质粒上有lacZ，在4540bp-4695bp处。但MCS位点不在lacZ处，所以不能用蓝白斑筛选，用氨苄抗性筛选也很好筛的
就是转化后不要培养过久免得长卫星菌落就好
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终于熬成木虫了……
9楼2010-08-22 06:41:51
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hesu1105

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
怎么没有人回复解答啊？
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相信我最后一定能成功
10楼2020-06-21 10:04:17
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