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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pGEX-4T-1质粒的抗性是什么？
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】pGEX-4T-1质粒的抗性是什么？ 已有1人参与

小弟搞到这个pGEX-4T-1质粒，对它还不是很了解，它有什么抗性？还是转化后用的蓝白筛选？
在BamH I/Not I酶切后，插入目的基因片段，是不是这个位置？
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1楼 2010-08-20 09:00:52
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★
feiye2214(金币+1): 2010-08-22 09:10:11
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~~ 2010-08-22 09:21:57
GST标签后的多克隆位点可以用来插入片段，注意检查插入片段不要发生移码
这个质粒上有lacZ，在4540bp-4695bp处。但MCS位点不在lacZ处，所以不能用蓝白斑筛选，用氨苄抗性筛选也很好筛的
就是转化后不要培养过久免得长卫星菌落就好
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终于熬成木虫了……
9楼2010-08-22 06:41:51
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adou2008

银虫 (初入文坛)
feiye2214(金币+1): 2010-08-22 09:10:33
我以前用的是氨苄抗生素，
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学习，学习，再学习
2楼2010-08-20 12:44:04
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一夜不留痕

银虫 (初入文坛)
feiye2214(金币+1): 2010-08-22 09:10:38
在含氨苄青霉素培养的，貌似用的限制性内切酶是BamHI/SalI，是用蓝白斑筛选的！
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最好不相见，如此便可不相恋
3楼2010-08-20 12:53:57
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zhandeguo1

银虫 (小有名气)

抗性

百度一下弄到质粒图谱就知道了。在多克隆位点选择酶切位点就对了。
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4楼2010-08-20 13:46:18
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